利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2022102779132
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种合成L‑缬氨酸的大肠杆菌,其特征在于,所述大肠杆菌命名为大肠杆菌W3110,于2022年03月18日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山,保藏编号为CCTCC M 2022293。

2.一种合成L‑缬氨酸的重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌以权利要求1所述的大肠杆菌为出发菌株,过表达正转录调控因子和/或降低表达负转录调控因子,得到所述重组大肠杆菌;

其中,所述正转录调控因子为DNA结合转录双调控子pdhR、DNA结合转录双调控子crp和DNA结合转录双调控子lrp;所述负转录调控因子为RNA聚合酶σ因子rpoS。

3.根据权利要求2所述的合成L‑缬氨酸的重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌过表达二羧酸还原异构酶基因ilvC、二羟酸脱水酶基因ilvD和支链氨基酸氨基转移酶基因ilvE。

4.根据权利要求2所述的合成L‑缬氨酸的重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌敲除支链氨基酸转运蛋白基因brnQ,并将支链氨基酸输出蛋白基因brnFE整合到已敲除支链氨基酸转运蛋白基因brnQ的位点上。

5.根据权利要求2所述的合成L‑缬氨酸的重组大肠杆菌,其特征在于,所述重组大肠杆菌整合磷酸葡萄糖酸脱水酶基因edd和KHG/KDPG醛缩酶基因eda。

6.根据权利要求2所述的合成L‑缬氨酸的重组大肠杆菌,其特征在于,所述转录调控因子以ptrc99A或ptrc28A为载体。

7.一种权利要求2‑6任一项所述的重组大肠杆菌的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:以权利要求1所述的大肠杆菌为出发菌株,过表达转录调控因子,所述转录调控因子为正转录调控因子和/或负转录调控因子;所述正转录调控因子为DNA结合转录双调控子pdhR、DNA结合转录双调控子crp和DNA结合转录双调控子lrp;所述负转录调控因子为RNA聚合酶σ因子rpoS;

和/或,过表达二羧酸还原异构酶基因ilvC、二羟酸脱水酶基因ilvD和支链氨基酸氨基转移酶基因ilvE;

和/或,敲除支链氨基酸转运蛋白基因brnQ,并将支链氨基酸输出蛋白基因brnFE整合到已敲除支链氨基酸转运蛋白基因brnQ的位点上;

和/或,并将磷酸葡萄糖酸脱水酶基因edd和KHG/KDPG醛缩酶基因eda整合,得到所述重组大肠杆菌。

8.一种权利要求1所述的大肠杆菌或权利要求2‑6任一项所述的重组大肠杆菌在发酵合成L‑缬氨酸中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述发酵的条件为:以丙酮酸为前体物,溶氧量为10‑20 %,发酵时间为24‑72 h,温度为35‑40 ℃,转速为210‑230 rpm。