1.一种产物耐受型腈水解酶突变体，其特征在于，所述突变体为下列之一：（1）将SEQ ID No.2所示氨基酸序列的第29位丝氨酸突变为丙氨酸；（2）将SEQ ID No.2所示氨基酸序列第145位天冬酰胺突变为天冬氨酸；（3）将SEQ ID No.2所示氨基酸序列第29位的丝氨酸突变为丙氨酸，同时将第145位天冬酰胺突变为天冬氨酸。

2.一种权利要求1所述腈水解酶突变体的编码基因。

3.一种含权利要求2所述编码基因的重组质粒。

4.一种含有权利要求2所述编码基因的重组基因工程菌。

5.一种权利要求1所述产物耐受型腈水解酶突变体在生物催化1‑氰基环己基乙腈制备

1‑氰基环己基乙酸中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的应用以含所述腈水解酶突变体编码基因的重组基因工程菌经诱导表达获得的湿菌体、湿菌体超声破碎后提取的粗酶或粗酶提取纯化的纯酶为催化剂，以1‑氰基环己基乙腈为底物，以pH为5.0‑10.0的缓冲液或超纯水为反应介质构成反应体系，在20‑55℃、200‑400rpm条件下恒温水浴反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得1‑氰基环己基乙酸。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，反应体系中底物浓度为500‑1000 mM；所述催化剂用量以湿菌体重量计为10‑50 g/L。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述湿菌体按如下方法制备：将含腈水解酶突变体编码基因的重组基因工程菌接种到含终浓度50µg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，于37℃培养8‑10h，培养液按体积浓度2%的接种量接种至含终浓度50µg/mL卡那霉素的新鲜LB液体培养基中，37℃培养至菌体浓度OD600为0.6‑0.8之间，加入终浓度为0.1mM的IPTG，28℃、180rpm诱导表达10‑12h，4℃、8000rpm离心10min，收集菌体，用生理盐水清洗后，得到湿菌体。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述粗酶或纯酶按如下步骤制备：

（1）粗酶液：将含腈水解酶突变体编码基因的工程菌经诱导培养获得的湿菌体用pH 7、

200 mM Na2HPO4‑NaH2PO4缓冲液重悬成菌悬液，超声波破碎，破碎混合液离心后，取上清液作为粗酶液；所述超声波破碎条件为：40 W，30 min，1 s破碎，1 s暂停；

（2）纯酶：将Ni‑NTA柱用平衡缓冲液冲洗后，将步骤（1）粗酶液以1 mL/min的流速上样，上样量为2个柱体积，上样结束后用平衡缓冲液洗脱弱吸附的杂蛋白，流速为2 mL/min，洗脱5个柱体积；再用洗脱缓冲液洗脱3‑5个柱体积，收集目的蛋白，流速为1 mL/min；最后将收集的目的蛋白分装透析袋，以pH 7、50 mM Na2HPO4‑NaH2PO4缓冲液为透析液室温透析10 h，取截留液即为纯酶液；平衡缓冲液为含终浓度300 mM NaCl+50 mM咪唑的pH8、50 mM Na2HPO4‑NaH2PO4；洗脱缓冲液为含终浓度300 mM NaCl+500 mM咪唑的pH8、50 mM Na2HPO4‑NaH2PO4。