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专利号: 2015107249749
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2024-11-11
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种金纳米花-银纳米粒子双金属纳米组装体的藻毒素拉曼传感器的构建,其特征在于提供一种表面凸起可控的金纳米花简便合成方法,制备一种基于“Y”型核酸组装构型的金纳米花-银纳米粒子双金属纳米组装体,构建藻毒素快速、特异性的拉曼传感检测器。

具体步骤:

(1)金纳米花的合成

采用种子生长法制备金纳米花,以氯金酸溶液为前驱体,柠檬酸钠为还原剂制备金种。

通过在金种表面还原氯金酸制备金纳米花,控制盐酸羟胺的浓度可以得到具有不同凸起大小的金纳米花结构。金纳米花的表面等离子特性由紫外-可见分光计测定,通过透射电子显微镜进行表征金纳米花的结构。

(2)金纳米花-银纳米粒子双金属纳米组装体的制备

通过金巯共价键在金纳米花表面修饰探针1,控制金纳米花和探针1的摩尔比是

1:100,离心去除未修饰上的探针1;采用硼氢化钠还原法合成银纳米粒子,通过银巯共价键在银纳米粒子表面修饰探针2,控制银纳米粒子和探针2的摩尔比是1:10,离心去除未修饰上的探针2,随后在已制备好的银纳米粒子-探针2复合物表面修饰拉曼信标分子4-硝基苯硫酚。

取上述制备的金纳米花-探针1溶液、4-硝基苯硫酚-银纳米粒子-探针2溶液和藻毒素适配体,基于“Y”型核酸组装构型混合杂交,制备金纳米花和银纳米粒子组装的拉曼信号强的核-卫星状纳米结构,离心去除未组装上的银纳米粒子。

(3)拉曼传感器的构建

在已制备好的金纳米花和银纳米粒子构成的核-卫星状组装体中加入不同浓度的藻毒素溶液,在室温下孵育30min,部分银纳米粒子表面的适配体和藻毒素分子特异性识别,使得部分银纳米粒子从金纳米花表面脱落,离心去除被解离下来的银纳米粒子,通过拉曼光谱仪测定解离后的纳米组装体的拉曼信号,建立纳米组装体拉曼信号强度和藻毒素浓度间的标准曲线。

2.根据权利要求1所述一种金纳米花-银纳米粒子双金属纳米组装体的藻毒素拉曼传感器的构建,其特征在于金纳米花的制备:将1.25mL 5mM氯金酸溶液加入23.75mL超纯水中,混合均匀,快速加热至沸腾,沸腾条件下剧烈搅拌5min。快速加入500μL新鲜配置的质量分数为1%柠檬酸钠,反应10min。在剧烈搅拌下将500μL上述溶液快速加入到500μL质量分数1%的聚乙烯吡咯烷酮和1mL

0.1M磷酸盐缓冲溶液的混合体系中,加入300μL 10mM的氯金酸溶液和300μL 10mM盐酸羟胺溶液。反应2h后,将混合物以5000转每分钟转速下离心5min,将沉淀物溶解在100μL的超纯水中。控制盐酸羟胺的浓度可以得到具有不同凸起大小的金纳米花结构。

3.根据权利要求1所述一种金纳米花-银纳米粒子双金属纳米组装体的藻毒素拉曼传感器的构建,其特征在于金纳米花和银纳米粒子的表面修饰:取上述制备的100μL金纳米花溶液,加入10μL 10μM巯基修饰的探针1,金纳米花和探针1的摩尔比是1:100。混合均匀后加入到500μL含50mM氯化钠的Tris-硼酸缓冲液中孵育。12h后,将混合物以5000转每分钟转速下离心5min,去除为偶联上的探针1,将沉淀重悬在100μL的Tris-硼酸缓冲液中。

采用硼氢化钠还原法制备粒径大小为10nm的银纳米粒子,取2mL的银纳米粒子以8000转每分钟的速度离心10min,去除上清液,将沉淀重悬在200μL超纯水中。取200μL上述制备的银纳米粒子,加入20μL 10μM巯基修饰的探针2,银纳米粒子与探针2的摩尔比是

1:10。12h后,将混合物以10000转每分钟转速下离心10min,去除为偶联上的探针2,将沉淀重悬在100μL的Tris-硼酸缓冲液中。加入2μL 100μM 4-硝基苯硫酚,使其终浓度为2μM,过夜反应,混合物以10000转每分钟转速下离心10min,去除为偶联上的4-硝基苯硫酚,将沉淀重悬在100μL的Tris-硼酸缓冲液中。

4.根据权利要求1所述一种金纳米花-银纳米粒子双金属纳米组装体的藻毒素拉曼传感器的构建,其特征在于金纳米花-银纳米粒子双金属纳米组装体的制备:取50μL金纳米花-探针1溶液、100μL 4-硝基苯硫酚-银纳米粒子-探针2溶液和100μL 1μM藻毒素适配体,混于500μL Tris-硼酸缓冲液中。12h后,溶液以5000转每分钟转速下离心5min,将沉淀物溶解在100μL超纯水中。基于“Y”型核酸组装构型制备金纳米花和银纳米粒子组装成拉曼信号强的核-卫星状纳米结构。

5.根据权利要求1所述一种金纳米花-银纳米粒子双金属纳米组装体的藻毒素拉曼传感器的构建,其特征在于藻毒素拉曼传感器的构建:将制备好的金纳米花和银纳米粒子构成的核-卫星状组装体作为拉曼基底用于藻毒素的检测。取100μL上述制备的组装体加入到500μL 20mM Tris-盐酸中,加入200μL不同浓度的藻毒素溶液混合(0、0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10和50nM),在室温下孵育30min,部分银纳米粒子表面的适配体和藻毒素分子特异性识别,使得部分银纳米粒子从金纳米花表面脱落,离心去除被解离下来的银纳米粒子,将沉淀物用70%乙醇溶液洗涤三次,以净化解离后的纳米组装体。通过拉曼光谱仪测定解离后的纳米组装体的拉曼信号,扫描时间为

10s。建立纳米组装体拉曼信号强度和藻毒素浓度间的标准曲线。