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专利号: 2022102145527
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种诱导家蚕泌丝器官完全退化制备纯丝胶茧的转基因方法,其特征在于,其通过改造的GAL4/UAS高效双元表达系统,在家蚕后部丝腺细胞中特异上调BmFMBP1(SEQ ID NO .1)、BmE93(SEQ ID NO .2)和BmSdRFP(SEQ ID NO  .3)基因导致后部丝腺器官完全退化消失,但仍能正常吐丝结茧;

其中GAL4载体包括:以丝素蛋白重链fibH为启动子,其核苷酸序列为SEQ ID NO  .4;

GAL4蛋白结合结构域的基因序列为靶序列,其核苷酸序列为SEQ ID NO .5;

UAS载体包括:10×UAS序列及下游目的基因序列,其中10×UAS序列的核苷酸序列为SEQ ID NO .6。

2.依据权利要求1所述的诱导家蚕泌丝器官完全退化制备纯丝胶茧的转基因方法,其特征在于,其包括步骤:步骤S1,GAL4/UAS表达载体构建;

步骤S2,GAL4/UAS转基因家蚕的制作;

步骤S3,通过对3种后部丝腺特异过表达的GAL4/UAS转基因家蚕的五龄第6天丝腺进行形态学的观察,并用相机拍摄照片;

步骤S4,通过对上述3种后部丝腺特异的GAL4/UAS转基因家蚕的茧壳进行形态学的观察,并用相机拍摄照片;

步骤S5,通过对上述3种后部丝腺特异的GAL4/UAS转基因家蚕的五龄第6天的丝腺进行DNA提取,提取成功的DNA根据设计的引物进行PCR扩增,扩增结果进行核酸电泳。

3.依据权利要求2所述的诱导家蚕泌丝器官完全退化制备纯丝胶茧的转基因方法,其特征在于,GAL4/UAS表达载体构建步骤包括构建了家蚕后部丝腺特异激活表达GAL4的载体及以UAS连接目的基因的表达载体。

4.依据权利要求1所述的诱导家蚕泌丝器官完全退化制备纯丝胶茧的转基因方法,其特征在于,GAL4/UAS转基因家蚕的制作包括:通过将上述两种表达载体通过家蚕胚胎显微注射,获得眼睛发红色荧光的GAL4转基因家蚕和眼睛发绿色荧光的UAS敲除转基因家蚕,将两种转基因家蚕进行两两杂交,获得眼睛即发红色荧光也发绿色荧光的过表达转基因家蚕。