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专利号: 2022102135296
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法,其特征在于,其通过GAL4/UAS系统,分别构建了在家蚕后部丝腺中特异性过表达BmDimm和特异性敲除BmYki和BmSd,均获得了后部丝腺增大的转基因家蚕;通过在家蚕后部丝腺中特异性敲除BmYki能提高家蚕的丝素蛋白含量,或通过在家蚕后部丝腺中特异性敲除BmSd能提高家蚕的丝素蛋白含量,或通过在家蚕后部丝腺中特异性过表达BmDimm能提高家蚕的丝素蛋白含量。

2.依据权利要求1所述的提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法,其特征在于,通过在家蚕后部丝腺中特异性敲除BmYki能提高家蚕的丝素蛋白含量的方法,其包括以下步骤:步骤S1、GAL4表达载体构建;

步骤S2、敲除BmYki的UAS表达载体构建;

步骤S3、PSG中特异性敲除BmYki的转基因蚕的制作;

步骤S4、通过对PSG中特异性敲除BmYki的转基因蚕的5L6D丝腺进行形态学观察,并用相机拍摄照片;

步骤S5、通过对PSG中特异性敲除BmYki的转基因蚕的茧壳进行形态学观察,并用相机拍摄照片留证和验证;

步骤S6、通过对PSG中特异性敲除BmYki的转基因蚕的5L6D丝腺进行DNA提取,提取成功的DNA根据敲除位点设计的引物进行PCR扩增,扩增结果进行核酸电泳。

3.依据权利要求1所述的提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法,其特征在于,通过在家蚕后部丝腺中特异性敲除BmSd能提高家蚕的丝素蛋白含量的方法,其包括以下步骤:步骤S1、GAL4表达载体构建;

步骤S2、敲除BmSd的UAS表达载体构建;

步骤S3、PSG中特异性敲除BmSd的转基因蚕的制作;

步骤S4、通过对PSG中特异性敲除BmSd的转基因蚕的5L6D丝腺进行形态学观察,并用相机拍摄照片留证和验证;

步骤S5、通过对PSG中特异性敲除BmSd的转基因蚕的茧壳进行形态学观察,并用相机拍摄照片留证和验证;

步骤S6、通过对PSG中特异性敲除BmSd的转基因蚕的5L6D丝腺进行DNA提取,提取成功的DNA根据敲除位点设计的引物进行PCR扩增,扩增结果进行核酸电泳。

4.依据权利要求1所述的提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法,其特征在于,通过在家蚕后部丝腺中特异性过表达BmDimm能提高家蚕的丝素蛋白含量的方法,其包括以下步骤:步骤S1、GAL4表达载体构建;

步骤S2、过表达BmDimm的UAS表达载体构建;

步骤S3、PSG中特异性过表达BmDimm的转基因蚕的制作;

步骤S4、通过对PSG中特异性过表达BmDimm的转基因蚕的5L6D丝腺进行形态学观察,并用相机拍摄照片留证和验证;

步骤S5、通过对PSG中特异性过表达BmDimm的转基因蚕的茧壳进行形态学观察,并用相机拍摄照片留证和验证;

步骤S6、通过对PSG中特异性过表达BmDimm的转基因蚕的5L6D丝腺进行DNA提取,提取成功的DNA根据BmDimm位点设计引物进行PCR扩增,扩增结果进行核酸电泳,进行基因组鉴定。

5.依据权利要求2所述的提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法,其特征在于,GAL4表达载体构建:构建了家蚕后部丝腺特异激活表达的GAL4载体,即以丝素蛋白重链fibH为启动子,GAL4蛋白结合结构域的基因序列为目的基因的GAL4表达载体。

6.依据权利要求2所述的提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法,其特征在于,敲除BmYki的UAS表达载体构建:依次将10×UAS序列、根据家蚕密码子偏好进行优化的编码Cas 

9蛋白序列、U6启动子序列、两个BmYki敲除靶点、Ser1‑polyA为终止信号等多个序列进行串联形成目的基因表达框,随后将目的基因表达框插入到piggyBac载体骨架上即pBac[3×P3‑ECFP]上并命名为敲除BmYki。

7.依据权利要求2所述的提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法,其特征在于,通过胚胎显微注射及荧光筛选获得对应的HG4转基因家蚕和UAS转基因家蚕,通过将两者进行两两杂交,筛选眼睛即发红色荧光也发绿色荧的转基因家蚕。

8.依据权利要求3所述的提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法,其特征在于,敲除BmSd的UAS表达载体构建:依次将10×UAS序列、根据家蚕密码子偏好进行优化的编码Cas 9蛋白序列、U6启动子序列、两个BmSd敲除靶点、Ser1‑polyA为终止信号等多个序列进行串联形成目的基因表达框,随后将目的基因表达框插入到piggyBac载体骨架上即pBac[3×P3‑ECFP]上并命名为敲除BmSd。

9.依据权利要求7所述的提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法,其特征在于,过表达BmDimm的UAS表达载体构建:依次将10×UAS序列、BmDimm为目的基因、Ser1‑polyA为终止信号等多个序列进行串联形成目的基因表达框,随后将目的基因表达框插入到piggyBac载体骨架上即pBac[3×P3‑ECFP]上并命名为过表达BmDimm。

10.一种利用提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法获得的家蚕品种,其特征在于,其通过GAL4/UAS系统,分别构建了在家蚕后部丝腺中特异性过表达BmDimm和特异性敲除BmYki和BmSd,均获得了后部丝腺增大的转基因家蚕,进而生产家蚕吐丝量增加的高产蚕丝品种。