1.用于靶向敲除人ARHGAP11B基因的特异性sgRNA,其特征在于,所述sgRNA在人ARHGAP11B基因的靶向位点位于人ARHGAP11B基因的6号外显子上;所述sgRNA对应的核苷酸序列为以下情况的至少一种:
a)sgRNA1:
gcgtgtaccagactttatcc;
b)sgRNA2:
ggaaaagataccagccatgt;
c)sgRNA3:
gactttatcctggaaaagat。
2.一种CRISPR/Cas9载体,其特征在于,所述CRISPR/Cas9载体包括权利要求1所述的用于靶向敲除人ARHGAP11B基因的特异性sgRNA。
3.如权利要求2所述的CRISPR/Cas9载体,其特征在于,所述CRISPR/Cas9载体由质粒px458‑exon6和质粒pCEP4‑middle酶切后,带入权利要求1所述的用于靶向敲除人ARHGAP11B基因的特异性sgRNA、抗性基因Puro和GFP荧光蛋白基因。
4.一种宿主细胞,其特征在于,包括权利要求2或3所述的CRISPR/Cas9载体。
5.一种基于CRISPR/Cas9系统敲除iPSC细胞系中ARHGAP11B基因的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、将权利要求2或3所述的CRISPR/Cas9载体转染iPSC,培养,通过嘌呤霉素筛选成功转染的阳性iPSC;
S2、对成功转染的阳性iPSC进行多能性鉴定。
6.如权利要求5所述的构建方法,其特征在于,所述步骤S1中转染为采用BEX CUY2 EDITⅡ转染系统的电转。
7.如权利要求5所述的构建方法,其特征在于,步骤S1转染结束后,将iPSC加入到含TM
10%CloneRTM的mTeSR 1培养基中进行培养。
8.如权利要求5所述的构建方法,其特征在于,所述构建方法还包括对阳性iPSC进行PCR鉴定的步骤,PCR鉴定中的引物如SEQ ID NO:5~6所示。
9.如权利要求5~8任一项所述的构建方法获得的iPSC细胞系。
10.如权利要求9所述的iPSC细胞系在建立ARHGAP11B基因敲除的体外细胞模型中的应用。