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专利号: 2022101076816
申请人: 淮阴工学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-12
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种倏逝波光纤探针定量检测生物分子的方法,其特征在于,包括以下步骤:(A1)将待测生物分子样品滴入倏逝波光纤探针上孵育,用水清洗倏逝波光纤探针得到结合了待测生物分子的光纤探针;

(A2)将光点击分子溶液滴至检测皿中,将结合了待测生物分子的光纤探针插至检测皿中,光纤头穿过底部微孔,埋入橡胶垫中,光纤探头全部没入光点击分子溶液,所述光点击分子为带有叠氮‑炔烃或四氮唑‑烯烃环化加成反应基团的荧光响应型化合物;

(A3)将激光导入光纤进行光点击反应,然后抽出光纤探针;

(A4)检测步骤(A3)反应后的溶液的荧光强度,根据测得的荧光强度与标准强度曲线对比,利用插值法定量待测生物分子的浓度;

其中,倏逝波光纤探针的制备方法,包括以下步骤:

(B1)将石英光纤一端的保护层和外包层去除干净,用沸腾的Piranha溶液浸泡使光纤芯羟基化,用水清洗,用氮气吹干,得到羟基化光纤;

(B2)将羟基化光纤放入3‑氨基‑三甲氧基硅烷甲醇溶液中进行硅烷化反应,将反应后光纤清洗吹干,用甲醇清洗后再用水冲洗,用氮气吹干,得到硅烷化光纤;

(B3)将硅烷化光纤浸入到戊二醛水溶液中进行反应,用水清洗,用氮气吹干,将羧基氨基聚乙二醇和醛基反应得到羧基氨基饰性聚乙二醇,将羧基氨基饰性聚乙二醇共价连接到硅烷化光纤上,得到羧基化光纤;

(B4)将羧基化光纤用EDC/NHS活化后置于抗体分子溶液中,摇床孵育过夜,用水清洗,得到偶联抗体的倏逝波光纤探针。

2.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(B1)中,所述石英光纤的芯径为

100‑400μm,Piranha溶液为3 6:1的浓硫酸和双氧水的混合溶液,所述浸泡时间为20‑~

30min。

3.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(B2)中,所述3‑氨基‑三甲氧基硅烷甲醇溶液的浓度为5 10%,所述戊二醛水溶液浓度为2.5 5%,所述硅烷化反应时间为12~ ~ ~

24h。

4.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(B3)中,所述羧基氨基聚乙二醇的分子量为500‑2000Da。

5.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(B4)中,所述的抗体分子为金黄色葡萄球菌蛋白A溶液,所述抗体分子溶液的浓度为5 20μM。

~

6.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(A1)中,所述孵育时间为30‑

60min。

7.根据权利要求1所述的检测方法,其特征在于,步骤(A3)中,所述光点击反应时间为

5‑30min。