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专利号: 2022101009968
申请人: 南京师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-08-18
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种诱导间充质干细胞分化为胰岛β细胞的方法,其特征在于,所述方法包括:预诱导和正式诱导;所述预诱导中微囊泡MV工作浓度为35‑40μg/mL,烟酰胺工作浓度为5mM,胰岛素转铁蛋白‑硒ITS工作浓度为0.5%;所述正式诱导中,微囊泡MV工作浓度为70‑80μg/mL,烟酰胺工作浓度为5‑10mM,胰岛素转铁蛋白‑硒ITS工作浓度为0.5‑1%;

干细胞培养体系中,采用无细胞外囊泡EV的血清;

所述微囊泡MV来源于大鼠胰岛素瘤细胞,所述微囊泡MV的获得,包括:培养大鼠胰岛素瘤细胞,每36‑48h收集一次培养基,300‑2000g离心去除死细胞和细胞碎片,12000g超速离心去除上清获得沉淀,用PBS重悬沉淀,将沉淀定量到150‑190μg/mL,4℃保存备用。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述微囊泡MV的粒径范围为50nm‑500nm。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述预诱导的诱导时间为2‑4天;所述正式诱导的诱导时间为15‑18天。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,包括:将间充质干细胞铺板后,待细胞汇合

20%‑40%时,加入微囊泡MV工作浓度为35‑40μg/mL的预诱导体系;培养2‑4天,加入微囊泡MV工作浓度为70‑80μg/mL的正式诱导体系。

5.一种诱导间充质干细胞分化为胰岛β细胞的诱导剂,其特征在于,所述诱导剂包括:预诱导剂和正式诱导剂;

所述预诱导剂中,微囊泡MV工作浓度为35‑40μg/mL,烟酰胺工作浓度为5mM,胰岛素转铁蛋白‑硒ITS工作浓度为0.5%;

所述正式诱导剂中,微囊泡MV工作浓度为70‑80μg/mL,烟酰胺工作浓度为5‑10mM,胰岛素转铁蛋白‑硒ITS工作浓度为0.5‑1%;

所述微囊泡MV为具胰岛β细胞功能的细胞所产生的微囊泡,所述微囊泡MV来源于大鼠胰岛素瘤细胞,所述微囊泡MV的获得包括:培养大鼠胰岛素瘤细胞,每36‑48h收集一次培养基,300‑2000g离心去除死细胞和细胞碎片,12000g超速离心去除上清获得沉淀,用PBS重悬沉淀,将沉淀定量到150‑190μg/mL,4℃保存备用。

6.一种诱导间充质干细胞分化为胰岛β细胞的培养基,其特征在于,包括:预诱导培养基和正式诱导培养基;所述培养基中,均含有具胰岛β细胞功能的细胞所产生的微囊泡MV、DMEM、8‑10%不含EV的血清、烟酰胺和胰岛素转铁蛋白‑硒ITS;

所述微囊泡MV来源于大鼠胰岛素瘤细胞,所述微囊泡MV的获得包括:培养大鼠胰岛素瘤细胞,每36‑48h收集一次培养基,300‑2000g离心去除死细胞和细胞碎片,12000g超速离心去除上清获得沉淀,用PBS重悬沉淀,将沉淀定量到150‑190μg/mL,4℃保存备用;

所述微囊泡MV的粒径为50‑500nm;

所述预诱导培养基中,微囊泡MV工作浓度为35‑40μg/mL,烟酰胺工作浓度为5mM,胰岛素转铁蛋白‑硒ITS工作浓度为0.5%;

所述正式诱导培养基中,微囊泡MV工作浓度为70‑80μg/mL,烟酰胺工作浓度为5‑10mM,胰岛素转铁蛋白‑硒ITS工作浓度为0.5‑1%。

7.权利要求5所述的诱导剂或权利要求6所述的培养基在提高间充质干细胞诱导分化为胰岛β细胞的诱导效率中的应用。