1.一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于所述的方法是以副干酪乳杆菌的破胞液为原料进行上样，以阴离子交换半疏水晶胶的堆积床层作为分离吸附介质，通过晶胶层析上样吸附，使所述破胞液原料中的活性酶充分吸附在阴离子交换半疏水晶胶上；然后将固载了活性酶的阴离子交换半疏水晶胶做为生物催化剂，加入至含有苯丙酮酸和NADH辅酶的反应液中进行生物转化反应，生成苯乳酸。

2.如权利要求1所述的一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于具体包括以下步骤：

1）将副干酪乳杆菌菌株的菌体按照1 : 15 30的固液比重悬于15 30 mM的PBS缓冲液~ ~

内得到细胞悬浮液，固液比的单位为g/mL，然后将所述细胞悬浮液超声破壁，高速离心，取上清液即为副干酪乳杆菌的破胞液，该上清液作为上样液；

2）将阴离子交换半疏水晶胶填充在层析柱内，先以5～10倍层析柱柱体积的15 30 mM~

的PBS缓冲液冲洗层析柱，然后取5～10倍层析柱柱体积的步骤1）所得上样液过层析柱，使破胞液内的酶充分吸附在层析柱上；

3）将苯丙酮酸和NADH辅酶配制在80 120 mM的PBS缓冲液中得到转化液，转化液中苯丙~

酮酸浓度控制在50 μg/ml～100 μg/ml，优选为50 μg/ml～80μg/ml，NADH浓度控制在0.15μmol/ml～0.3μmol/ml，优选为0.25 0.3μmol/ml；

~

4）取步骤2）层析柱内的湿颗粒加入至步骤3）配制的转化液中，湿颗粒与转化液的固液比为1 g：（10～20）mL，优选为1 g：15mL，然后在转速50～200 rpm、温度30～50 ℃下进行生物转化反应，生成苯乳酸。

3.如权利要求2所述的一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于步骤1）中，超声破壁的处理时间为30～60 min，超声功率为300 500W，优选为400W；高速离~

心的转速为6000～10000 rpm、时间为5～20 min。

4.如权利要求2所述的一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于步骤1）2）中的15 30 mM的PBS 缓冲液，以及步骤3）中80 120 mM的PBS缓冲液的pH均为6.8~ ~ ~

7.2。

~

5.如权利要求2所述的一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于步骤3）中过层析柱的流速为0.5～5 cm/min，优选为1 2 cm/min。

~

6.如权利要求2所述的一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于步骤1）中，副干酪乳杆菌菌株的菌体制备方法为：将副干酪乳杆菌菌株在MRS培养基中经过两次活化得到种子液，将种子液按照2 6%的接种量接至MRS培养基中，在30 40 ℃条件下进~ ~

行静置培养，培养40 60 h后将培养基离心得到菌体粘稠体，该菌体粘稠体即为所述副干酪~

乳杆菌菌株的菌体。

7.如权利要求1所述的一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于所述的阴离子交换半疏水晶胶的制备方法包括以下步骤：S1：将甲基丙烯酸羟乙酯HEMA、甲基丙烯酸丁酯BMA两种单体和交联剂聚乙二醇双丙烯酸酯PEGDA溶于超纯水中形成溶液，存于4 ℃冰箱待用；

S2：向步骤S1所得溶液中加入引发剂过硫酸铵APS和加速剂四甲基乙二胺TEMED，得到水相；配制含体积分数0.5 2.0%表面活性剂Span 80的白油溶液，得到油相；

~

S3：利用多微管反应器制备晶胶微球，将步骤S2所得水相和油相分别注入多微管反应器中，‑20 ‑34.5 ℃结晶致孔和聚合形成晶胶微球；

~

S4：最后在晶胶微球上接枝甲基丙烯酸二甲氨基乙酯DMAEMA，即得到所述的阴离子交换半疏水晶胶。

8.如权利要求7所述的一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于步骤S1溶液中HEMA、BMA和PEGDA的质量浓度分别为6 7%、3 4%和2 3%，优选为6.4 6.6%、3.2~ ~ ~ ~

3.5%和2.3 2.6%。

~ ~

9.如权利要求7所述的一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于步骤S2中，APS和TEMED的添加质量分别占溶液中HEMA、BMA和PEGDA三者总质量的1.0 1.5%~

和1.5 1.8%，优选为1.2%和1.6%。

~

10.如权利要求7所述的一种利用生物催化剂催化转化合成苯乳酸的方法，其特征在于步骤S4中在晶胶微球上接枝甲基丙烯酸二甲氨基乙酯DMAEMA的操作过程为：a）晶胶微球装在烧杯内，置于45 50 ℃的恒温槽水浴锅内预热；

~

b）按照体积比1.5 3:1将0.05 0.1M的Cu（Ⅲ）溶液与0.5 2 M的NaCl溶液混合配制成催~ ~ ~

化剂溶液，提前预热至45 50 ℃；将0.5 2 M的甲基丙烯酸二甲氨基乙酯DMAEMA单体溶液提~ ~

前预热至45 50 ℃；

~

将配制的催化剂溶液倒入步骤a）装有晶胶微球的烧杯内，45 50 ℃密封反应30 60 ~ ~

min后，倒出催化剂溶液，倒入DMAEMA单体溶液后继续密封反应1 3 h，反应结束之后先用~

HCl溶液冲去未聚合或发生自聚的单体，最后用超纯水冲洗，即制备完成；其中，上述催化剂溶液以及DMAEMA单体溶液的加入量，均是晶胶微球湿体积的1 3倍。

~