1.一种促进FTO高表达的NPM1突变白血病细胞细胞凋亡的方法，其特征在于，所述方法通过阻滞FTO高表达的NPM1突变白血病细胞于G2/M细胞周期来促进凋亡，包括以下步骤：（1）分析NPM1突变白血病患者中m6A去甲基化酶的表达水平，筛选出FTO基因和蛋白水平相对高表达的NPM1突变型OCI‑AML3细胞系；

（2）用靶向FTO基因的shRNA慢病毒载体感染所述OCI‑AML3细胞系，使所述OCI‑AML3细胞系中的FTO基因被敲低，进而使所述OCI‑AML3细胞阻滞在有丝分裂的G2/M期，随后发生凋亡，所述靶向FTO基因的shRNA序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；或者，（3）使用50 μM 或100 μM甲氯芬酸钠处理所述OCI‑AML3细胞系24 h，所述甲氯芬酸钠使所述OCI‑AML3细胞阻滞在有丝分裂的G2/M期，随后发生凋亡。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中分析检测NPM1突变白血病患者中m6A去甲基化酶的表达水平的具体操作如下：从肿瘤基因数据库TCGA中获取AML样本的RNA‑seq数据，从GSE14468和GSE15434两个数据集中获取AML样本的基因表达芯片数据，然后采用t检验方法来比较NPM1突变AML和非NPM1突变AML之间FTO基因水平表达的差异，筛选出FTO基因和蛋白水平相对高表达的NPM1突变型OCI‑AML3细胞系。

3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）进一步利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测所述NPM1突变型OCI‑AML3细胞系中FTO表达水平，具体操作如下：qRT‑PCR检测FTO基因表达水平：

（1）收集对数生长期的细胞，用RNA提取试剂提取细胞总RNA；

（2）逆转录：

配置体积为20 μL的如下体系：

5×PrimeScript RT Master Mix 4 μL

Total RNA 1 μg

RNase Free ddH2O 达到20 μL

反应条件：37 ℃×15 min，85 ℃×5 s，4 ℃ 冷却，cDNA 于‑40 ℃ 保存；

（3）qRT‑PCR：

配置体积为10μL的如下体系：

cDNA 1.0

TB Green™ Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus) 5.0Forward primer 0.4

Reverse primer 0.4

ddH2O 3.2

qRT‑PCR反应条件：第一阶段，95 °C 预变性30 s；第二阶段，95 °C 变性5 s，58 °C 退火30 s，72 °C充分延伸20 s，采集荧光，循环39次；融解曲线条件：(65 °C 95 °C）每上升~–ΔΔCt

0.5 °C 采集1次荧光；以β‑actin为内参，相对定量值结果采用2 计算；qRT‑PCR引物序列如SEQ ID No.3‑ SEQ ID No.6所示；

（4）蛋白质印迹法检测FTO蛋白表达水平：

蛋白质提取：收集对数生长期的细胞，用预冷的PBS洗涤3次，3，000 rpm×3 min；留取细胞沉淀，加入沉淀量两倍体积的含有蛋白酶抑制剂的RIPA 蛋白质裂解液，充分震荡混匀；冰上裂解细胞30 min，每5 min涡旋振荡一次，重复6次，13，300 rpm×30 min，4 °C离心；吸取上清溶液至预冷的新EP管中，BCA法检测蛋白质浓度，剩余蛋白样品加入5×loading buffer，煮沸变性后于−80 °C保存；

SDS‑PAGE凝胶电泳：配制12%的分离胶和5%的浓缩胶，缓慢匀速灌胶后，在凝胶表层缓慢加入适量无水乙醇，37  °C静置30 min；弃去无水乙醇，在完全凝固的分离胶上层灌入配好的5% 的浓缩胶，并插上齿梳，37 °C静置30 min；小心拔出齿梳，加入1×SDS电泳缓冲液覆盖加样孔；向加样孔中加入50 μg变性的蛋白样品，同时在样本两侧的孔中加入蛋白marker作为分子量参照；在玻璃板内灌满电泳缓冲液后，按照二步法电泳分离蛋白：第一步，电压80 V，电流150 mA，30 min；第二步，电泳120 V，电流200 mA，60 90 min；

~

转膜：待电泳结束后，首先根据待测蛋白分子量大小，切取适当凝胶并剪裁与之匹配的聚偏二氟乙烯膜，将切取的凝胶浸泡在预冷的湿转缓冲液中，将裁剪好的聚偏二氟乙烯膜置于甲醇中浸泡15 s，蒸馏水洗涤 2 min；然后将聚偏二氟乙烯膜和滤纸片浸泡在预冷的湿转缓冲液中； 最后由正极向负极方向依次安放海绵、滤纸、聚偏二氟乙烯膜和凝胶，以

210 mA的恒流电泳转膜；

封闭：转膜结束后，将聚偏二氟乙烯膜放入5% 的蛋白封闭液中，室温封闭2 h；

抗体孵育：首先，用TBST清洗膜上残留的封闭液；用定性滤纸吸干膜上残留液体后，将膜置于蜡板上，加入预先稀释好的一抗工作液均匀覆盖聚偏二氟乙烯膜，4 °C孵育过夜；回收一抗工作液后，将聚偏二氟乙烯膜放入TBST中洗涤3次，每次 10 min；最后，加入预先稀释好的辣根过氧化物酶标记二抗于聚偏二氟乙烯膜上，室温孵育1 h，TBST 洗涤3次，每次 

10 min；

显色及成像：暗室内，将聚偏二氟乙烯膜置于化学发光板上，然后加入预先配置的化学发光试剂均匀覆盖聚偏二氟乙烯膜，于成像系统中显示成像。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）用靶向FTO基因的shRNA慢病毒载体感染所述OCI‑AML3细胞系的具体操作如下：（1）合成靶向敲低FTO基因的shRNA序列；

（2）慢病毒感染细胞并筛选出稳转的细胞株：首先，收集对数生长期的OCI‑AML3细胞接

5 8

种于新的24孔板中，保证密度为每孔1×10个细胞；随后，每孔加入25 60 μL滴度为1×10 ~TU/mL的病毒液和20 μL HitransG P，并利用细胞培养液将每孔细胞悬液配至500 μL，充分混匀；于37 ℃、5% CO2培养箱中培养48~72小时后，观察细胞状态和荧光强度，并更换培养皿及新鲜培养基；最后，待感染效率达80%时，加2 μg/mL嘌呤霉素筛选7 14天后即可获得稳~转细胞株，并继续扩大培养，用于后续试验。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）进一步采用m6A斑点法检测所述OCI‑AML3细胞中m6a水平，具体操作如下：（1）RNA稀释及变性：将RNA样本的浓度用RNase free双蒸水分别稀释至200 ng/μL、100 ng/μL、50 ng/μL；稀释过的RNA样本95 °C 变性3 min，随后立即置于冰上；

（2）RNA点样：剪裁Hybond‑N+膜，移液枪吸取2 μL变性过的RNA样本并点于膜上形成一个圆形；待膜干燥，置于紫外灯下照射数秒以促进RNA交联于膜上；

（3）封闭：将Hybond‑N+膜放入5% 的蛋白封闭液中，室温封闭2 h；

（4）抗体孵育：首先，用PBST清洗膜上残留的封闭液；用定性滤纸吸干膜上残留液体后，将膜置于蜡板上，加入预先稀释好的m6A一抗工作液均匀覆盖Hybond‑N+膜，4 °C孵育过夜；

回收一抗工作液后，将Hybond‑N+膜放入PBST中洗涤3次，每次 10 min；最后，加入预先稀释好的辣根过氧化物酶标记二抗于Hybond‑N+膜上，室温孵育1 h，PBST 洗涤3次，每次 10 min；

（5）显色及成像：暗室内，将Hybond‑N+膜置于化学发光板上，然后加入预先配置的化学发光试剂均匀覆盖偏二氟乙烯膜，于成像系统中显示成像。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）进一步用活细胞计数试剂盒检测存活细胞数并绘制细胞增殖曲线，具体操作如下：4

收集各组细胞, 以每孔1.5×10个细胞数接种于96孔板中, 每组设置5个复孔，同时设立空白对照，于孵箱中继续培养；培养第0、24 h、48 h和72 h时每孔加入10 μL CCK‑8试剂，混匀后继续培养3 h；于450 nm波长下检测吸光度OD值, 以OD450值为纵坐标、培养时间为横坐标来绘制细胞增殖曲线。

7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）进一步利用5‑乙炔基‑2‑脱氧尿苷细胞增殖试剂盒检测细胞体外增值能力，具体操作如下：6

收集各组细胞，以每孔1.0×10个细胞数接种于6孔板中，用10 μM EdU工作液于37 ℃、

5% CO2培养箱中处理细胞3 h；收集EdU标记的细胞，用预冷的PBS洗涤3次，3，000 rpm×3 min；然后，加入适量PBS重悬沉淀制成细胞悬液，并均匀涂布于盖玻片表面，室温下干燥；4% 多聚甲醛室温固定细胞15 min后，PBS清洗3次，5 min/次；用0.1% Triton X‑100室温透膜处理20 min，重复PBS清洗步骤；按说明书配制Click反应液，每孔加入0.5 mL Click反应液，轻轻摇匀后室温避光孵育30 min；随后步骤均要避光完成，吸除Click反应液，重复PBS清洗步骤，每孔加入0.5 mL DAPI染液，室温孵育30 min；重复PBS清洗步骤并封片，4 ℃ 保存备用。

8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）进一步利用流式细胞术观察验证细胞周期和凋亡改变，具体操作如下：FCM实验检测细胞周期：收集各组细胞，用预冷的PBS洗涤3次，1，500 rpm×5 min；留取细胞沉淀，加入500 μL 75% 乙醇固定细胞，4 ℃ 过夜；弃去上清，加入100 μL RNase A，37 °C避光孵育30 min；弃去上清，加入400 μL PI，4  °C避光孵育30 min，反应完成后立即上机检测；

FCM实验检测细胞凋亡：收集各组细胞，用预冷的PBS洗涤3次，1，500 rpm×5 min；取55

×10 个PBS重悬的细胞，300 g×5 min，弃上清后加入500 μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞；细胞悬液中加入5 μL的Annexin V‑APC和5 μL的DAPI染液，轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15 min，反应完成后立即上机检测。