1.一种电化学生物传感器,其特征在于:包括工作电极、参比电极、对电极和电解质溶液;
所述工作电极包括依次层叠的捕获电极、循环肿瘤细胞和信号放大探针,所述捕获电极依次负载壳聚糖‑多壁碳纳米管复合薄膜、葡萄糖氧化酶和适配体;所述参比电极为饱和Ag/AgCl电极,所述对电极为铂电极;所述电解质溶液为含葡萄糖的铁氰化钾溶液。
2.如权利要求1所述的电化学生物传感器,其特征在于:所述工作电极为玻碳电极,所述玻碳电极表面负载多壁碳纳米管‑壳聚糖复合薄膜、葡萄糖氧化酶和适配体,所述玻碳电极、所述循环肿瘤细胞和所述信号放大探针构成三明治结构GCE/MWCNTs‑CS/GOD/apt/CTCs/anti‑EpCAM‑PS‑HRP;所述信号放大探针为anti‑EpCAM‑PS‑HRP探针,所述捕获电极包括GCE/MWCNTs‑CS/GOD/apt,所述电解质溶液为含葡萄糖的铁氰化钾溶液,所述anti‑EpCAM‑PS‑HRP探针与所述捕获电极的GOD在所述含葡萄糖的铁氰化钾溶液中构成双酶级联反应信号放大体系。
3.一种根据权利要求1或2所述的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于:所述方法包括如下步骤:
(1)采用多壁碳纳米管‑壳聚糖复合薄膜、葡萄糖氧化酶和适配体制备工作电极的电极捕捉界面;
(2)制备信号放大探针;
(3)采用所述电极捕捉界面捕获循环肿瘤细胞后,与信号放大探针构建三明治结构工作电极,饱和Ag/AgCl电极为参比电极,铂电极为对电极,电解质溶液为含葡萄糖的铁氰化钾溶液得到电化学生物传感器。
4.如权利要求3所述的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于:所述电极捕捉界面制备包括对玻碳电极进行预处理,通过层层修饰依次在所述玻碳电极上修饰多壁碳纳米管、壳聚糖、葡萄糖氧化酶、戊二醛、牛血清白蛋白和适配体;将壳聚糖粉溶解于乙酸溶液中,在室温下制得壳聚糖溶液,并将多壁碳纳米管加入壳聚糖溶液中制备了壳聚糖‑多壁碳纳米管混合溶液;将所述葡萄糖氧化酶掺杂到所述壳聚糖‑多壁碳纳米管混合溶液后,将靶向CTC的适配体经1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC和N‑羟基琥珀酰亚胺NHS进行活化,通过戊二醛连接到壳聚糖膜表面,逐步修饰得到GCE/MWCNTs‑CS/GOD/apt。
5.如权利要求4所述的电化学生物传感器的制备方法,其特征在于:将信号放大探针制备包括在羧基聚苯乙烯微球上修饰上辣根过氧化酶HRP和抗体anti‑EpCAM;所述羧基聚苯乙烯微球用EDC和NHS进行羧基活化处理后,经anti‑EpCAM和HRP修饰到所述羧基聚苯乙烯微球表面,制得探针anti‑EpCAM‑PS‑HRP。
6.一种对权利要求3~5中任一项制备的电化学生物传感器的应用,其特征在于:将所述电化学生物传感器应用于循环肿瘤细胞检测。
7.如权利要求6所述的电化学生物传感器的应用,其特征在于:所述电化学生物传感器是基于葡萄糖氧化酶和辣根过氧化酶的双酶级联反应,放大检测体系电化学信号对应于循环肿瘤细胞的浓度变化而实现循环肿瘤细胞的检测。
8.如权利要求7所述的电化学生物传感器的应用,其特征在于:将捕捉界面修饰完成的电极与细胞进行捕捉孵育,捕捉孵育完成后,在所述捕捉电极上滴加探针anti‑EpCAM‑PS‑HRP作为工作电极,饱和Ag/AgCl电极为参比电极,铂电极为对电极,在含有葡萄糖的铁氰化钾溶液作为电解质溶液中记录和检测电化学信号;根据循环肿瘤细胞溶液浓度与电化学信号的对应关系实现对循环肿瘤细胞的检测。
9.如权利要求7所述的电化学生物传感器的应用,其特征在于:根据循环肿瘤细胞溶液浓度与电化学信号的对应关系,循环肿瘤细胞溶液的浓度与微分脉冲伏安法DPV峰值电流y的线性关系曲线为y=13.941lgC+17.438,其中C为循环肿瘤细胞溶液的浓度。
10.如权利要求9所述的电化学生物传感器的应用,其特征在于:所述循环肿瘤细胞检6
测线性范围为10cells/mL~10cells/mL,检测限为3cells/mL。