1.一种检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
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步骤一. 将浓度为10 ‑10 CFU/mL的模板菌加入溶液中,再加入浓度为4.7‑9.4µmol/mL功能单体和浓度为0.1‑0.4µmol/mL的荧光单体进行预组装,获得分子印迹预聚液,所述模板菌为革兰氏阴性菌;
步骤二. 向步骤一制备的分子印迹预聚液中依次加入浓度为100 1000 mM交联剂和质~
量浓度2‑10 %引发剂,搅拌聚合溶液,生成分子印迹荧光纳米粒子,这些纳米粒子吸附在模板菌表面;
步骤三. 用洗脱溶液去除步骤二中的模板菌,得到能够特异性识别目标细菌的分子印迹荧光纳米粒子。
2.根据权利要求1所述的一种检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子的制备方法,其特征在于,步骤一中所述模板菌为大肠杆菌O157:H7或荧光假单胞菌,所述溶液为磷酸盐缓冲液和乙醇的混合液,且乙醇的体积分数为5‑15 %。
3.根据权利要求1所述的一种检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子的制备方法,其特征在于,步骤一中功能单体的浓度为4.7µmol/mL,荧光单体的浓度为0.2µmol/mL,8
模板菌的浓度为 0.42*10 CFU/mL,磷酸盐缓冲液和乙醇的混合液中乙醇的体积分数为
15%。
4.根据权利要求1所述的一种检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子的制备方法,其特征在于,步骤二中所述交联剂的浓度为 849 mM,引发剂的质量分数为6%。
5.根据权利要求1所述的一种检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子的制备方法,其特征在于,步骤二中交联剂为四乙氧基硅烷或四甲氧基硅烷,所述引发剂为氨水,搅拌速度为700‑1500rpm。
6.根据权利要求1所述的一种检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子的制备方法,其特征在于,步骤一中功能单体为苯硼酸硅烷化试剂,通过醛基苯硼酸和氨基硅烷化试剂按照摩尔比1:1在乙醇中一步反应获得;荧光单体可以通过含有异氰酸酯或异硫氰酸酯的荧光染料和氨基硅烷化试剂按照摩尔比1:1在乙醇中一步反应获得,所得功能单体和荧光单体无需纯化。
7.根据权利要求6所述的一种检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述醛基苯硼酸为3‑甲酰基苯硼酸,2‑甲酰基苯硼酸,4‑甲酰基苯硼酸,2‑氟‑3‑醛基苯硼酸,4‑氟‑3‑醛基苯硼酸,或3‑氟‑4‑醛基苯硼酸中任一种。
8.根据权利要求6所述的一种检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述氨基硅烷化试剂为3‑氨基丙基‑三乙氧基硅烷、3‑氨基丙基‑三甲氧基硅烷、3‑(2‑氨基乙基氨基)丙基‑三甲氧基硅烷,或二乙烯三胺基丙基‑三甲氧基硅烷。
9.根据权利要求6所述的一种检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子的制备方法,其特征在于,所述荧光染料为异氰酸酯荧光素类染料、异硫氰酸酯荧光素类染料、或异硫氰酸酯罗丹明类染料。
10.基于权利要求1‑9中任一制备方法制备所得检测革兰氏阴性菌的分子印迹荧光纳米粒子。