1.一种基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)分别收集正常蚕p50(p50‑)、油蚕op50(op50‑)以及穿刺注射BmNPV后的p50(p50+)和op50(op50+)的血淋巴样品;
(2)采集正常蚕p50、油蚕op50以及穿刺注射BmNPV后的p50和op50血淋巴样品的代谢图谱信息;
(3)代谢组学数据的预处理;
(4)数据的差异显著性分析,筛选出显著变化的代谢物,记为生物标志物;
(5)代谢物的通路富集分析,并根据代谢物数据库鉴定这些生物标志物,将挑选出的分子靶标作为鉴定家蚕抗性水平的依据,建立BmNPV抗性品系家蚕的筛选标准。
2.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法,其特征在于:步骤(2)中用以检测的血淋巴样品制备方法如下:室温解冻家蚕血淋巴,加入乙腈进行蛋白质沉淀,搅拌混合,离心后收集上清液。
3.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法,其特征在于:步骤(2)的过程包括:对L‑苯丙氨酸、L‑天冬酰胺、L‑鸟氨酸、L‑赖氨酸、L‑蛋氨酸、L‑组氨酸、L‑色氨酸、羟脯氨酸、L‑瓜氨酸、L‑脯氨酸、L‑胱氨酸、L‑天冬氨酸、L‑谷氨酰胺、L‑精氨酸、柠檬酸、α‑酮戊二酸、苹果酸、琥珀酸、L‑半胱氨酸、L‑苯丙氨酸、L‑丝氨酸、L‑苏氨酸、L‑酪氨酸、L‑缬氨酸、丙酮酸、肌氨酸、富马酸、乳酸28种代谢物进行色谱分离,检测的28种分析物都是存在于家蚕血淋巴的内源性代谢物,使用的化学品纯度都大于98%,并且全部溶解于水。
4.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法,其特征在于:步骤(3)数据预处理包括:通过Progenesis QI软件对原始数据进行预处理;然后根据SIMCA‑P13.0软件处理得到的正交偏最小二乘判别分析结果中的相关参数R2X、R2Y和Q2,对不同组间代谢谱的差异以及代谢物的相对强度进行评估。
5.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法,其特征在于:步骤(4)所述的差异显著性分析包括:使用SPSS 23软件分析统计学差异,通过单向方差分析和独立样本T检验分析不同血淋巴样品间的显著差异;通过Fisher分类对测得数据的诊断价值进行评估,根据逐步判别法区分p50‑、op50‑、p50+和op50+;利用交叉验证法评估分类准确性;选定的代谢物将通过ROC进行进一步分析,并结合OPLS‑DA分析结果区分出差异显著的代谢物,记为生物标志物。
6.根据权利要求1所述的基于代谢组学技术建立BmNPV抗性品系家蚕筛选标准的方法,其特征在于:步骤(5)的过程包括:通过Metaboanalyst.ca网站分析差异代谢物富集的代谢通路,获得p50和op50应对BmNPV感染时的代谢机制,随后通过KEGG和HMDB代谢物数据库鉴定这些生物标志物,然后在其中挑选出用以检测的分子靶标,以此建立BmNPV抗性品系家蚕的筛选标准。