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专利号: 2021114154607
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种CHO细胞基因NW_003613781.1内稳定表达蛋白质的位点,其特征在于,所述的稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_003613781.1的第1497087‑1497287碱基内。

2.根据权利要求1所述的CHO细胞基因NW_003613781.1内稳定表达蛋白质的位点,其特征在于,所述的CHO细胞基因NW_003613781.1的第1497087‑1497287碱基的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的CHO细胞基因NW_003613781.1内稳定表达蛋白质的位点,其特征在于,所述的稳定表达蛋白质的位点可被CRISPR/Cas9技术以5'NNNNNNNNNN NNNNNNNNNNNGG 3'作为靶序列识别。

4.根据权利要求1所述的CHO细胞基因NW_003613781.1内稳定表达蛋白质的位点,其特征在于,所述的蛋白质为分子量小于160KDa的蛋白质或多肽。

5.权利要求1~4任一项所述的CHO细胞基因NW_003613781.1内稳定表达蛋白质的位点在CHO细胞稳定表达外源蛋白质或多肽中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述的应用具体是将外源蛋白质或多肽的编码基因构建在所述的CHO细胞基因NW_003613781.1内稳定表达蛋白质的位点上。

7.一种用于在CHO细胞中表达蛋白质的表达载体,其特征在于,所述的蛋白质的编码基因位于所述的表达载体上5’同源臂和3’同源臂中间的区域,所述的5’同源臂和3’同源臂分别为权利要求1所述的稳定表达蛋白质的位点上下游长度为600bp的序列。

8.根据权利要求7所述的表达载体,其特征在于,所述的表达载体上还包括位于所述的蛋白质的编码基因上游的启动子序列,所述的启动子控制所述的蛋白质的表达。

9.根据权利要求8所述的表达载体,其特征在于,所述的启动子为:人类巨细胞病毒来源的强哺乳动物表达启动子、人延长因子1α来源的强哺乳动物表达启动子、猿猴空泡病毒

40来源的哺乳动物表达启动子、磷酸甘油酸酯激酶基因来源的哺乳动物启动子、人类泛素C基因来源的哺乳动物启动子、β‑肌动蛋白基因来源的哺乳动物启动子、强杂交哺乳动物启动子中的一种。

10.一种定点整合表达蛋白质的CHO重组细胞,其特征在于,所述的CHO重组细胞通过将权利要求7所述的用于在CHO细胞中表达蛋白质的表达载体、靶序列对应的sgRNA质粒以及Cas9质粒转入CHO细胞得到。