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专利号: 2021111053977
申请人: 重庆医科大学国际体外诊断研究院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.检测结核分枝杆菌gyrA氟喹诺酮耐药基因突变的crRNA,其特征在于,所述crRNA的间隔序列包含SEQ ID No.1至SEQ ID No.13中任一条所示序列。

2.根据权利要求1所述的crRNA,其特征在于,所述crRNA用于检测结核分枝杆菌gyrA基因的点突变;优选地,所述点突变为造成GyrA第88、90、91、94位氨基酸改变的单碱基替换。

3.一种CRISPR‑Cas13a系统,其特征在于,包括如权利要求1所述的crRNA。

4.根据权利要求3所述的CRISPR‑Cas13a系统,其特征在于,还包括能够表达Cas13a蛋白的质粒、信号报告探针以及核酸酶缓冲液。

5.根据权利要求4所述的CRISPR‑Cas13a系统,其特征在于,所述Cas13a蛋白选自LwCas13a或LshCas13a;优选地,所述Cas13a蛋白为LwCas13a。

6.权利要求1或2所述的crRNA或权利要求3~5任一项所述CRISPR‑Cas13a系统在结核分枝杆菌gyrA基因突变检测中的应用;优选地,所述应用为用于结核分枝杆菌氟喹诺酮耐药突变的检测;所述应用为非疾病诊断目的。

7.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒含有如权利要求1或2所述的crRNA;优选地,所述试剂盒用于检测结核分枝杆菌氟喹诺酮耐药突变。

8.一种非疾病诊断目的的结核分枝杆菌gyrA基因突变的检测方法,其特征在于,所述方法包括:获得待测样本RNA;将权利要求1所述的crRNA与所述样本RNA、LwCas13a蛋白以及荧光标记探针和RNA酶抑制剂在核酸酶缓冲液体系中孵育后进行检测。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,在所述核酸酶缓冲液体系孵育后,加入到胶体金试纸条样品检测区进行检测或者将所述体系孵育后荧光检测仪测定荧光值;优选地,在酶标仪上每隔1~2min检测一次荧光。

10.根据权利要求8或9所述的方法,其特征在于,所述缓冲液体系中的各组分含量为:

LwCas13a 400‑500nM;crRNA 800‑1000nM;样本RNA1600‑2000nM;荧光标记探针120‑200nM。