1.一种基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述试剂盒由发卡核酸和反应底物组成,所述的发卡核酸包括发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6及羟乙基哌嗪乙硫磺酸盐缓冲液;
H1核酸分子序列如SEQ ID NO:1,H2核酸分子序列如SEQ ID NO:2,H3核酸分子序列如SEQ ID NO:3,H4核酸分子序列如SEQ ID NO:4,H5核酸分子序列如SEQ ID NO:5,H6核酸分子序列如SEQ ID NO:6;
所述的反应底物包括氯化血红素粉末、鲁米诺粉末和30%过氧化氢溶液。
2.根据权利要求1所述的基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述的发卡还包括H7,H7核酸分子序列如SEQ ID NO:7。
3.根据权利要求2所述的基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒,其特征在于,发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6的摩尔浓度比为1‑2:1‑2:6‑7:8‑9:
7‑8:8‑9;或者所述的发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6、发卡H7的摩尔浓度比为1‑2:1‑2:6‑7:8‑9:7‑8:8‑9:0.3‑0.8。
4.根据权利要求3所述的基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒,其特征在于,发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6的摩尔浓度比为2:2:6:8:7:8;或者所述的发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6、发卡H7的摩尔浓度比为2:2:6:8:
7:8:0.5。
5.一种基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒,其特征在于,包括如下步骤:
(1)分别将溶于HEPES的发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6和发卡H7退火,然后按摩尔比混合,加入miRNA和HEPES共同孵育12小时,再加入氯化血红素溶液孵育1小时,然后将反应液稀释20倍;
(2)向稀释20倍的反应液中加入鲁米诺溶液后,置于发光杯中,快速注入过氧化氢溶液,通过微弱化学发光测量仪检测化学发光信号,实现对miRNA的检测;
所述的H1核酸分子序列如SEQ ID NO:1,H2核酸分子序列如SEQ ID NO:2,H3核酸分子序列如SEQ ID NO:3,H4核酸分子序列如SEQ ID NO:4,H5核酸分子序列如SEQ ID NO:5,H6核酸分子序列如SEQ ID NO:6。
6.根据权利要求5所述的基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述的发卡还包括H7,H7核酸分子序列如SEQ ID NO:7。
7.根据权利要求6所述的基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒,其特征在于,发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6的摩尔浓度比为1‑2:1‑2:6‑7:8‑9:
7‑8:8‑9;
或者所述的发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6、发卡H7的摩尔浓度比为
1‑2:1‑2:6‑7:8‑9:7‑8:8‑9:0.3‑0.8。
8.根据权利要求7所述的基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述的发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6的摩尔浓度比为2:2:6:8:7:
8;或者所述的发卡H1、发卡H2、发卡H3、发卡H4、发卡H5、发卡H6、发卡H7的摩尔浓度比为2:
2:6:8:7:8:0.5。
9.根据权利要求1‑4任一项所述的基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒在制备检测细胞裂解液中的miRNA‑21的含量的药物上的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,所述的基于恒温无酶多级扩增的miRNA化学发光检测试剂盒通过检测细胞裂解液中的miRNA‑21的含量在制备区分肿瘤细胞与正常细胞的药物中的应用,所述的肿瘤细胞包括HepG2、或HL‑7702细胞。