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专利号: 2021106555367
申请人: 湖南兀邦生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种以沙门氏菌鞭毛蛋白为分子佐剂的猪瘟病毒E2蛋白重组亚单位疫苗,其特征在于,其包括融合蛋白,该融合蛋白包括猪瘟病毒E2蛋白和具有佐剂效应的沙门氏菌鞭毛蛋白Flagellum,编码该融合蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的以沙门氏菌鞭毛蛋白为分子佐剂的猪瘟病毒E2蛋白重组亚单位疫苗,其特征在于,所述疫苗还包括GEL01佐剂。

3.如权利要求2所述的以沙门氏菌鞭毛蛋白为分子佐剂的猪瘟病毒E2蛋白重组亚单位疫苗,其特征在于,所述疫苗中GEL01佐剂与融合蛋白的体积比为1:4。

4.一种以沙门氏菌鞭毛蛋白为分子佐剂的猪瘟病毒E2蛋白重组亚单位疫苗的制备方法,其特征在于,该方法步骤如下:(1)以CSFV 2.1株的E2蛋白基因及肠炎鼠伤寒杆菌菌株(Enterica  serovar Typhimurium strain)的鞭毛蛋白Flagellum基因为基础,合成E2与Flagellum蛋白的融合表达基因片段E2‑Flagellum,该E2‑Flagellum基因片段序列如SEQ ID NO.1所示;

(2)通过基因克隆将E2‑Flagellum基因克隆至哺乳动物细胞表达载体pKS001的HindⅢ和EcoRⅠ中,构建重组表达载体pKS001‑E2‑Flagellum;

(3)将重组表达载体pKS001‑E2‑Flagellum转化表达细胞株,获得E2‑Flagellum蛋白;

(4)将E2‑Flagellum蛋白与GEL01佐剂按体积比1:4混匀。

5.如权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中构建重组表达载体的步骤如下:A.以合成的E2‑Flagellum基因片段为模板进行PCR扩增;

B.使用HindⅢ和EcoRⅠ限制性内切酶对扩增片段进行酶切,回收E2‑Flagellum基因片段;

C.使用HindⅢ和EcoRⅠ限制性内切酶对pKS001质粒进行酶切;

D.将E2‑Flagellum基因片段与酶切后的pKS001质粒进行连接。

6.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述步骤A中扩增时的引物为:E2‑Flagellum‑FP:5'‑AAGCTTGCCACCATGGTGCTGAGGGGCCAGGTGGTG‑3',E2‑Flagellum‑RP:5'‑GAATTCTTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCCTCA‑3'。

7.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述步骤B中酶切体系包括E2‑Flagellum基因片段120μL、HindⅢ6μL、EcoRⅠ6μL、10×Kbuffer24μL,水补充至240μL。

8.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述步骤C中酶切体系包括pKS001质粒

60μL、HindⅢ3μL、EcoRⅠ3μL、10×Kbuffer12μL及水42μL。

9.如权利要求5所述的制备方法,其特征在于,所述步骤D中连接体系包括pKS001载体2μL、E2‑Flagellum的PCR片段6μL、T4连接酶10μL、Ligase buffer2μL。

10.如权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述步骤(3)中的表达细胞株为哺乳动物细胞株CHO‑K1Q。