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专利号: 2021106244762
申请人: 湖南兀邦生物科技有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗,其特征在于,其包括猪瘟病毒E2蛋白和猪流行性腹泻病毒S1蛋白的融合蛋白,该融合蛋白为E2‑S1蛋白,编码该E2‑S1蛋白的E2‑S1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗,其特征在于,所述E2‑S1基因是分别以猪瘟病毒E2蛋白基因序列、猪流行性腹泻病毒S1蛋白基因序列作为N端序列和C端序列,中间添加GGGGSGGGGS序列的linker,进行重叠延伸PCR扩增得到。

3.如权利要求2所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗,其特征在于,所述猪瘟病毒E2蛋白基因的扩增引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示,猪流行性腹泻病毒S1蛋白基因的扩增引物序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

4.如权利要求1所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗,其特征在于,所述疫苗还包括免疫佐剂。

5.如权利要求4所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗,其特征在于,所述疫苗中融合蛋白与免疫佐剂的体积比为1:1。

6.如权利要求4所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗,其特征在于,所述免疫佐剂为ISA201VG佐剂。

7.一种猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗的制备方法,其特征在于,该方法步骤如下:

A.分别以猪瘟病毒E2蛋白基因序列、猪流行性腹泻病毒S1蛋白基因序列作为N端序列和C端序列,中间添加GGGGSGGGGS序列linker,进行重叠延伸PCR扩增出E2‑S1基因,该E2‑S1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;

B.将E2‑S1基因克隆至载体pKS001的HindⅢ和EcoRⅠ中,构建重组表达载体pKS001‑E2‑S1;

C.将重组表达载体pKS001‑E2‑S1转化表达细胞,构建稳定细胞株,表达获得重组融合蛋白E2‑S1。

8.如权利要求7所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗的制备方法,其特征在于,所述方法还包括步骤D:将重组融合蛋白E2‑S1与免疫佐剂按体积比1:1混合,制得。

9.如权利要求8所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗的制备方法,其特征在于,所述免疫佐剂为ISA201VG佐剂。

10.如权利要求7所述的猪瘟病毒与猪流行性腹泻病毒亚单位联合疫苗的制备方法,其特征在于,所述步骤C中的表达细胞株为哺乳动物细胞株CHO‑K1Q。