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专利号: 202110569216X
申请人: 三峡大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-05-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.蝗虫内生真菌Paraconiothyrium brasiliense来源的萜类化合物,其特征在于,所述化合物的结构如下所示:

2.权利要求1所述的蝗虫内生真菌Paraconiothyrium brasiliense来源的萜类化合物在制备抗血小板聚集中的药物上的应用。

3.蝗虫内生真菌Paraconiothyrium brasiliense,分类命名为Paraconiothyrium brasiliense MZ‑1,Paraconiothyrium brasiliense菌株于2016年5月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉大学),地址:湖北省武汉市武昌珞珈山,保藏名称为:巴西类壳小圆孢MZ‑1,保藏编号:CCTCCNO:M2016279。

4.权利要求3所述的蝗虫内生真菌Paraconiothyrium brasiliense用于发酵制备权利要求1所述的萜类化合物的用途。

5.一种发酵代谢生产权利要求1所述的萜类化合物的方法,其特征在于,包括将权利要求4所述的蝗虫内生真菌Paraconiothyrium brasiliense接种于适宜发酵培养基中进行发酵培养的步骤,所述的发酵培养基为PDA固体培养基,得到种子块,种子块接入PDB培养基培养,得到种子液,将种子液接入PDB培养基培养,培养过程中添加L‑色氨酸,继续发酵,得到发酵产物。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述的L‑色氨酸于培养4‑5天时分三批次添加,终浓度为0.8‑1mmol/L,培养25‑30天。

7.根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述的方法还包括对所述发酵产物进行分离提取的包括,步骤如下:

将发酵产物过滤得到菌丝体和发酵液,其中发酵液萃取、浓缩;菌丝体干燥、萃取、浓缩,合并萃取产物,再经过层析制备分离得到所述化合物。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,分离提取步骤为:(1)菌丝体经干燥后采用二氯甲烷萃取、二氯甲烷浸提后得到粗体物1,发酵液采用二氯甲烷萃取、二氯甲烷浸提后得到粗体物2;将粗体物1、粗体物2混合后用正相硅胶色谱层析进行分离,采用二氯甲烷、二氯甲烷/甲醇混合液进行洗脱,收集洗脱液;

(2)将洗脱液浓缩后,用甲醇溶剂溶解,再以Sephadex LH‑20凝胶色谱,用二氯甲烷/甲醇的混合溶剂洗脱,每分钟流速为1毫升,每10分钟收集为一个片段;将第20个片段用色谱甲醇溶解、过滤后,利用制备型反相高效液相色谱仪进行分离,色谱柱采用C18反相柱,流动相为乙腈/水体积比为65:35的混合溶剂,在保留时间为16分钟处收集峰,即得到化合物1;

将第35个片段采用色谱甲醇溶解且过滤后,利用制备型反相高效液相色谱仪进行分离,色谱柱采用C18反相柱,流动相为乙腈/水体积比为65:35的混合溶剂,在保留时间12分钟处收集峰,即得到化合物2。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,二氯甲烷/甲醇混合液进行洗脱过程中,采用梯度浓度进行洗脱,所述的梯度浓度中二氯甲烷/甲醇的体积比为9:1、8:1、

7:1、6:1、4:1、3:1。

10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,步骤(2)中,二氯甲烷/甲醇的体积比为8:

1。