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专利号: 2021105389586
申请人: 华中农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-22
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于筛选PGC‑1α小分子调控剂的人PGC‑1α基因启动子片段,其特征在于:所述启动子片段的核苷酸序列如SEQ ID No.23所示,该片段中的54‑55位碱基和71‑73位碱基能以氢键作用方式结合PGC‑1α小分子调控剂,且54‑55位碱基突变不能降低启动子活性,而

71‑73位碱基突变能使启动子活性降低,

所述PGC‑1α小分子调控剂的结构式如下:

。

2.权利要求1所述启动子片段的获得方法,其特征在于包括如下步骤:

(1)根据人PGC‑1α基因序列构建不同启动子的双荧光素酶报告基因载体,加入小分子化合物并检测双荧光素酶活性,筛选出能够直接激活PGC‑1α启动子的小分子调控剂;

(2)将能够直接被小分子调控剂激活的PGC‑1α启动子序列进行不同长度截短,并构建双荧光素酶报告基因载体,加入小分子调控剂并检测双荧光素酶活性,筛选出能够直接被小分子调控剂激活的PGC‑1α启动子截短体,从而确定小分子调控剂激活PGC‑1α转录的核心启动子区域;

(3)Avogadro软件模拟PGC‑1α基因启动子截短片段;

(4)用SYBYL软件对小分子调控剂及PGC‑1α基因启动子截短片段进行分子对接,筛选小分子调控剂与PGC‑1α基因启动子的结合位点;

(5)根据分子对接结果,针对不同的结合位点构建突变体并进行双荧光素酶活性检测,从而确定小分子调控剂与PGC‑1α启动子结合的具体位点。

3.如权利要求2所述启动子片段的获得方法,其特征在于:步骤(1)中,所述人PGC‑1α基因具有8个不同的转录本,对这8个转录本分析后,有4个不同的启动子,根据这4个不同的启动子序列设计引物并构建双荧光素酶报告基因载体。

4.如权利要求3所述启动子片段的获得方法,其特征在于:所述4个启动子的引物序列如SEQ ID No.1‑8所示,其中能够直接被小分子调控剂激活的PGC‑1α启动子的引物序列为SEQ ID No.3和SEQ ID No.4。

5.如权利要求2所述启动子片段的获得方法,其特征在于:步骤(2)中,首先将能够直接被小分子调控剂激活的PGC‑1α启动子序列进行4个不同长度的截短,通过检测双荧光素酶活性确定启动子区域,然后再将启动子区域进一步截短,最终确定小分子调控剂激活PGC‑1α转录的核心启动子区域。

6.如权利要求5所述启动子片段的获得方法,其特征在于:所述小分子调控剂激活PGC‑

1α转录的核心启动子区域的序列如SEQ ID No.23所示。

7.如权利要求2所述启动子片段的获得方法,其特征在于:步骤(4)中,所述小分子调控剂与PGC‑1α启动子的结合位点位于PGC‑1α启动子DNA双螺旋的大沟中,所述小分子调控剂与序列如SEQ ID No.23所示PGC‑1α启动子的54‑55位碱基和71‑73位碱基以氢键作用方式结合。

8.如权利要求7所述启动子片段的获得方法,其特征在于:步骤(5)中,构建序列如SEQ ID No.23所示PGC‑1α启动子的54‑55位碱基和71‑73位碱基突变体并验证其活性,其中54‑

55位碱基突变不能降低启动子活性,而71‑73位碱基突变能使启动子活性降低。