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专利号: 2022101681724
申请人: 新乡医学院
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-22
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种昆虫细胞用双荧光素酶报告基因载体,其特征在于,其是对psiCHECK‑2载体改造得到;所述改造包括使用OpIE2启动子替换原有SV40启动子,以及在HSV‑TK promoter上游和hRluc基因下游之间插入合成的DNA片段;所述psiCHECK‑2载体的hRluc基因下游供插入感兴趣的昆虫靶基因;所述合成的DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.如权利要求1所述的昆虫细胞用双荧光素酶报告基因载体,其特征在于,所述OpIE2启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.如权利要求2所述的昆虫细胞用双荧光素酶报告基因载体,其特征在于,通过对pIZ/V5‑His载体进行PCR扩增得到OpIE2启动子片段。

4.如权利要求3所述的昆虫细胞用双荧光素酶报告基因载体,其特征在于,所述PCR扩增的上游引物、下游引物分别如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4所示。

5.一种如权利要求1~4中任一项所述的昆虫细胞用双荧光素酶报告基因载体的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:Kpn I和Nhe I双酶切psiCHECK‑2质粒后回收酶切产物,将OpIE2基因片段与所述酶切产物连接,然后将所述合成的DNA片段连接到HSV‑TK promoter和Synthetic poly(A)之间。

6.一种昆虫细胞双荧光素酶报告基因重组载体,其特征在于,其是在如权利要求1~4中任一项所述的双荧光素酶报告基因载体的hRluc基因下游插入有昆虫靶基因。

7.如权利要求6所述的昆虫细胞双荧光素酶报告基因重组载体,其特征在于,所述昆虫靶基因为昆虫基因3′UTR序列。

8.如权利要求7所述的昆虫细胞双荧光素酶报告基因重组载体,其特征在于,所述昆虫基因3′UTR序列选自海藻糖酶基因3′UTR序列或葡萄糖脱氢酶基因3’UTR序列。

9.一种如权利要求6~8中任一项所述的昆虫细胞双荧光素酶报告基因重组载体在检测昆虫基因3 'UTR与miRNA的靶向关系方面的应用。

10.如权利要求9所述的应用,其特征在于,所述昆虫基因3  'UTR为海藻糖酶基因3  ′UTR序列或葡萄糖脱氢酶基因3’UTR序列,所述miRNA为miRNA‑317‑5p或miRNA‑34‑5p‑2。