1.伊短菌素高产工程菌,其特征在于,其是利用同源重组技术将野生型短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)中伊短菌素生物合成基因簇的原始启动子Pede替换为Pgrac、Pspc、Pshuttle‑09和P43而得到的。
2.根据权利要求1所述的伊短菌素高产工程菌,其特征在于,所述启动子Pgrac的核苷酸序列GeneBank登录号为MH328010.1;启动子Pshuttle‑09的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;启动子Pspc的核苷酸序列GeneBank登录号为EU864235.1;启动子P43的核苷酸序列GeneBank登录号为DQ264732.1。
3.根据权利要求1或2所述的伊短菌素高产工程菌的制备方法,其特征在于,将启动子Pgrac、Pspc、Pshuttle‑09或P43与抗性基因连接获得的融合片段,构建同源重组整合载体,利用同源重组技术将野生型短短芽孢杆菌中伊短菌素生物合成基因簇的原始启动子Pede替换为Pgrac、Pspc、Pshuttle‑09和P43得到相应的短短芽孢杆菌工程菌。
R
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述抗性基因是Apra。
R
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于,所述抗性基因Apra 的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述伊短菌素生物合成基因簇的原始启动子Pede的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,所述同源重组整合载体以载体pE194为出发载体,与所述融合片段及野生型短短芽孢杆菌中的ede操纵子中天然启动子区的上、下游同源序列片段构建得到同源重组整合载体。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述ede操纵子中天然启动子区的上游同源序列片段核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;ede操纵子中天然启动子区的下游同源序列片段核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示。
8.根据权利要求3至7任一项所述的制备方法,其特征在于,还包括对利用同源重组技R
术处理后的短短芽孢杆菌进行鉴定,所述鉴定的过程包括以抗性基因Apra的引物为探针对其进行PCR检测,以确保原始启动子Pede为Pgrac、Pspc、Pshuttle‑09和P43所替换。
9.权利要求1至2任一项所述的伊短菌素高产工程菌在制备伊短菌素中的应用,优选地,将所述伊短菌素高产工程菌发酵,获得发酵液上清液,从中纯化伊短菌素;更优选地,是将伊短菌素高产工程菌活化后,接种于NB液体培养基中进行发酵,再将所述发酵得到的发酵液上清液进行阳离子交换树脂吸附、氨水洗脱后,经旋转蒸发后,再进行高效液相色谱分离后得到所述伊短菌素。
10.一种菌剂,其特征在于,含有如权利要求1或2所述的伊短菌素高产工程菌。