1.一株可稳定高产毒黄素的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) HDXY-02,2017年4月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏编号为CGMCC No. 14054。
2.一种利用权利要求1所述的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) HDXY-02生产毒黄素的发酵培养方法,其特征在于将保藏号为CGMCC No. 14054的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) HDXY-02进行液体发酵培养或固体平板培养:(1)液体发酵:将活化后的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) HDXY-02接种于种子培养基中过夜培养,再以1~10%的接种量接种于KMB发酵培养基,培养条件为30~35℃,150~200 rpm,连续振荡培养48~72 h,培养基pH值在5.5~8.5之间;
(2)固体平板培养:将活化后的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) HDXY-02接种于种子培养基中,振荡培养24 h后,适当稀释,涂布于KMB固体培养基,培养条件为30~35℃,恒温静置培养48~72 h。
3.权利要求1所述的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) HDXY-02 发酵液中毒黄素的提取方法,其特征在于通过以下步骤实现:振荡培养结束后,4~20℃,4000~6000 g,离心发酵液4~5 min,吸取上清液,在上清液中加入1/2体积的氯仿或二氯甲烷,摇动5~10 min,静置20~40 min,移出有机相部分;同样方法用氯仿或二氯甲烷提取水相部分一次,重复3次,合并有机相,在旋转蒸发仪中40~45℃挥发有机溶剂,再加入少许氯仿或二氯甲烷提取一次,在40~45℃干燥箱中烘干得发酵粗提取物。
4.权利要求1所述的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) HDXY-02 固体培养基中毒黄素的提取方法,其特征在于通过以下步骤实现:刮去固体培养基表面的菌苔,将富含毒黄素的固体培养基切碎,加入1/2体积的氯仿或二氯甲烷,摇动5~10 min,静置20~40 min,移出有机相部分;同样方法用氯仿或二氯甲烷提取浸泡固体培养基,重复3次,合并有机相,在旋转蒸发仪中40~45℃挥发有机溶剂,再加入少许氯仿或二氯甲烷提取一次,在40~45℃干燥箱中烘干得发酵粗提取物。
5.权利要求1所述的伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp.) HDXY-02发酵液或固体培养提取的毒黄素粗品的提纯方法,其特征在于通过以下步骤实现:毒黄素粗提物采用硅胶柱层析进行分离纯化,梯度洗脱流程为:(二氯甲烷:甲醇)90:10→80:20→60:40→50:50→
30:70 →0:100(v/v);并进一步通过正丁醇重结晶两次,即得纯化后的毒黄素,纯化后的毒黄素可抑制多种病原菌(包括烟曲霉)的生长;同时能够抑制人结肠癌Lovo细胞,Ic50为0.43 μg/mL(2.226 μM)。