1.一株重组里氏木霉,其特征在于,以里氏木霉RUT‑C30Δura3为宿主,以PgpdA启动子表达了转录激活因子XYR1,并以改造后的人工Pcbh1启动子表达了木聚糖酶XYNII。
2.根据权利要求1所述的一株重组里氏木霉,其特征在于,编码所述转录因子XYR1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的一株重组里氏木霉,其特征在于,所述PgpdA启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.根据权利要求1所述的一株重组里氏木霉,其特征在于,所述人工改造Pcbh1启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
5.根据权利要求1所述的一株重组里氏木霉,其特征在于,编码所述木聚糖酶XYNII的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。
6.权利要求1‑5任一项所述的重组里氏木霉的构建方法,其特征在于,将XYR1基因与XYNII的基因分别连接到骨架质粒上,将重组质粒转化农杆菌AGL1,并将里氏木霉RUT‑C30Δura3与含有相应质粒的农杆菌共培养转化,得到重组里氏木霉。
7.根据权利要求6所述的重组里氏木霉的构建方法,其特征在于,(1)克隆PgpdA启动子与XYR1的编码框架以及ace1上下游片段,通过同源重组构建XYR1表达载体pXYR1;
(2)将重组质粒pXYR1转化农杆菌,挑取转化子与里氏木霉RUT‑C30Δura3共培养转化,得到单交换到ace1位点的转化子C30OExyr1;
(3)将cbh1的同源臂上游、潮霉素筛选标记HYG表达框、7IRPcbh1启动子、XYNII的序列、cbh1终止子序列通过InFusion连接到经过改造的pCAMBIA1301G,构建成载体p7IRCbhxyn2Δcbh1;所述经过改造的pCAMBIA1301G,是以pCAMBIA1301G为模板,用引物扩增载体,并从里氏木霉基因组上分别扩增启动子Ppki、ura3的CDS区域、终止子Tcbh2以及反筛重叠区域,然后将以上5个片段通过Infusion连接,得到经过改造的pCAMBIA1301G;
(4)将重组质粒p7IRCbhxyn2Δcbh1转化农杆菌,与里氏木霉C30OExyr1进行共培养转化,经潮霉素筛选得到定点整合cbh1位点的转化子C30OExyr1/7IRxyn2Δcbh1。
8.利用权利要求1‑5任一项所述的重组里氏木霉生产木聚糖酶的方法,其特征在于,包括以下步骤:培养重组里氏木霉,使之生孢;收集孢子,接到SDB培养基培养,然后转接到纤维素诱导发酵培养基、乳糖发酵培养基或乳糖发酵培养基,于28℃200rpm培养4‑5天,培养过程中重组里氏木霉表达木聚糖酶活力与木糖苷酶。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述纤维素诱导发酵培养基的配方是:
20g/L麸皮;30g/L微晶纤维素;4g/L KH2PO4;2.8g/L(NH4)2SO4;0.5g/L CaCl2;0.6g/L MgSO4;3g/L蛋白胨;0.6g/L尿素;1g/L吐温80;5g/L碳酸钙;0.005g/L FeSO4·7H2O;
0.0016g/L MnSO4·H2O;0.0014g/L ZnSO4·7H2O;0.002g/L CoCl2,pH 5.5。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述乳糖发酵培养基的配方是:50g/L乳糖;4g/L KH2PO4;2.8g/L(NH4)2SO4;0.5g/L CaCl2;0.6g/L MgSO4;3g/L蛋白胨;0.6g/L尿素;
1g/L吐温80;5g/L碳酸钙;0.005g/L FeSO4·7H2O;0.0016g/L MnSO4·H2O;0.0014g/L ZnSO4·7H2O;0.002g/L CoCl2,pH 5.5;
所述葡萄糖发酵培养基的配方是:50g/L葡萄糖;4g/L KH2PO4;2.8g/L(NH4)2SO4;0.5g/L CaCl2;0.6g/L MgSO4;3g/L蛋白胨;0.6g/L尿素;1g/L吐温80;5g/L碳酸钙;0.005g/L FeSO4·7H2O;0.0016g/L MnSO4·H2O;0.0014g/L ZnSO4·7H2O;0.002g/L CoCl2,pH 5.5。