1.一种小菜蛾蛋白Western Blot定量检测方法,其特征在于,包括如下步骤:采用苯酚/SDS提取法提取小菜蛾总蛋白,以α‑Tubulin为内参进行Western Blot分析;
所述苯酚/SDS提取法包括如下步骤:
将小菜蛾研磨成粉,与苯酚、dense SDS缓冲液混匀,离心取上清;
得到的上清液与甲醇混匀、冷冻后离心,弃上清;
所得沉淀用冷甲酮清洗,晾干后,加入1%SDS溶液溶解蛋白,离心得到的上清液为小菜蛾蛋白提取物;
所述WesternBlot分析包括如下步骤:
NC膜转膜封闭后洗涤,先与稀释后的抗α‑Tubulin抗体进行反应1,再与稀释后的二抗进行反应2,加入显影液显色。
2.根据权利要求1所述的小菜蛾蛋白Western Blot定量检测方法,其特征在于,所述小菜蛾与苯酚和dense SDS缓冲液的质量体积比为0.8‑1.2g:0.75‑0.85mL:0.75‑0.85mL。
3.根据权利要求1所述的小菜蛾蛋白Western Blot定量检测方法,其特征在于,所述dense SDS缓冲液的配方为29%‑31%蔗糖,1.5%‑2.5%SDS,0.1MTris‑HCl,pH 8.0,
4.9%‑5.1%2‑巯基乙醇。
4.根据权利要求1所述的小菜蛾蛋白Western Blot定量检测方法,其特征在于,所述上清液与甲醇混合的体积比为1:5。
5.根据权利要求1所述的小菜蛾蛋白Western Blot定量检测方法,其特征在于,所述溶解蛋白的条件为:在48‑52℃下水浴2h以上。
6.根据权利要求1所述的小菜蛾蛋白Western Blot定量检测方法,其特征在于,所述二抗为辣根过氧化物酶HRP标记的抗小鼠IgG。
7.根据权利要求1所述的小菜蛾蛋白Western Blot定量检测方法,其特征在于,所述封闭用的封闭液和稀释用的稀释液均为含2.8%‑3.2%BSA的1×TBST。
8.根据权利要求1所述的小菜蛾蛋白Western Blot定量检测方法,其特征在于,所述反应1的条件为室温反应2h或4℃反应过夜;所述反应2的条件为25‑27℃反应44‑46min。