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专利号: 2017102470931
申请人: 大连工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种测定胶原蛋白分子质量的方法,其特征在于,具体步骤如下:S1、制备标准样品:选用若干分子量分布于40~200kDa的蛋白作为分子质量标准品,所述分子质量标准品的数量大于等于5个;

S2、制备检测样品:取待测冻干后的胶原蛋白溶于质量浓度为0.01~0.1%的迭氮钠溶液中,搅拌至充分溶解,4℃静置24~48h,制得胶原蛋白液;

所述胶原蛋白液中待测胶原蛋白的终浓度为0.2~10mg/mL;

取所述胶原蛋白液,加入等体积的0.02mol/L NaH2PO4-0.2mol/L Na2SO4缓冲溶液,所述

0.02mol/L NaH2PO4-0.2mol/L Na2SO4缓冲溶液中含质量浓度为0~1%的十二烷基硫酸钠及0~6mol/L的尿素,摇床震荡1~5h,过0.45μm水系膜,得到待测胶原蛋白检测样品;

S3、样品测定:采用TSK-gel G4000-SWxl(7.8mm×30.0cm)凝胶过滤色谱柱测定分别步骤S1制得的分子质量标准品及步骤S2制得的待测胶原蛋白检测样品,得到分子量标准品以及胶原蛋白的保留时间;

具体检测条件为:

进样量:20μL;进样浓度:0.1~1mg/mL;检测波长:220nm;

流动相:所述流动相组成与步骤S2所述0.02mol/L NaH2PO4-0.2mol/L Na2SO4缓冲溶液的组成相同;

洗脱流速:0.2~1mL/min;

S4、根据步骤S3测得的分子量标准品保留时间,以标准品分子质量的对数与保留时间做线性回归,得到胶原蛋白分子量标准曲线;

将步骤S3得到的待测胶原蛋白的保留时间与标准曲线进行比对,即可得到胶原蛋白的分子质量。

2.根据权利要求1所述测定胶原蛋白分子质量的方法,其特征在于,所述标准样品为肌球蛋白、β-半乳糖苷酶、磷酸酶b、牛血清蛋白、卵清蛋白作为分子质量标准品。