1.一种高效定型内胚层细胞的诱导分化方法,其特征在于,包括如下步骤:A、在干细胞中添加TGF‑β激活剂、GSK‑3抑制剂、mTOR抑制剂进行诱导分化,在第一阶段培养基中培养;
B、添加TGF‑β的激活剂和BMP I型受体抑制剂诱导分化,在所述第一阶段培养基中完成定型内胚层细胞阶段。
2.根据权利要求1所述高效定型内胚层细胞的诱导分化方法,其特征在于,完成定型内胚层细胞阶段后,进一步诱导分化为组织细胞,所述组织包括肝脏、胰腺、肺、肠和胃中的一种。
3.根据权利要求1所述高效定型内胚层细胞的诱导分化方法,其特征在于,所述TGF‑β激活剂包括Activin A;所述GSK‑3抑制剂包括LY2090314、CHIR‑98014、BIO‑acetoxime、AZD2858、SAR502250、CHIR99021、CHIR‑99021trihydrochloride中的一种或多种;所述mTOR抑制剂包括Rapamycin、mTOR inhibitor‑3、Torin2中的一种或多种;所述BMP I型受体抑制剂包括K02288、LDN193189/DM3189中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述高效定型内胚层细胞的诱导分化方法,其特征在于,所述TGF‑β激活剂的使用浓度为5~20ng/ml,所述GSK‑3抑制剂的使用浓度为1~10μM,所述mTOR抑制剂的使用浓度为10~1000nM,所述BMP I型受体抑制剂的使用浓度为10~1000nM。
5.根据权利要求1所述高效定型内胚层细胞的诱导分化方法,其特征在于,所述步骤A历时1天;所述步骤B历时2天。
6.根据权利要求1所述高效定型内胚层细胞的诱导分化方法,其特征在于,所述组织为肝脏;完成定型内胚层细胞阶段后,进一步诱导分化包括如下步骤:C、完成定型内胚层细胞阶段后,进入诱导肝祖细胞阶段,添加二甲基亚砜诱导分化,在第二阶段培养基中完成诱导肝祖细胞阶段;
D、完成诱导肝祖细胞阶段后,进入诱导肝样细胞阶段,添加肝细胞生长因子、抑瘤素、糖皮质激素地塞米松诱导分化,在第三阶段培养基中完成诱导肝样细胞阶段;
E、完成诱导肝样细胞阶段,获得肝样细胞。
7.根据权利要求6所述高效定型内胚层细胞的诱导分化方法,其特征在于,所述肝细胞生长因子为HGF,所述抑瘤素为抑瘤素M。
8.根据权利要求6所述高效定型内胚层细胞的诱导分化方法,其特征在于,所述二甲基亚砜浓度为1%,所述肝细胞生长因子浓度为10ng/ml,所述抑瘤素浓度为20ng/ml,所述糖皮质激素地塞米松浓度为100nM。
9.根据权利要求6所述高效定型内胚层细胞的诱导分化方法,其特征在于,所述第一阶段培养基段为由青‑链霉素双抗以及B‑27组成的RPMI1640培养基;所述第二阶段培养基为由青‑链霉素双抗、Glutamax、DMSO以及Knockout‑SR组成的Knockout DMEM培养基;所述第三阶段培养基为由青‑链霉素双抗、Glutamx、Insulin‑Transferrin‑Selenium、ascorbic acid、hydrocortisone‑21‑hemisuccinate、Tryptose Phosphate Broth以及FBS组成的L‑
15培养基。