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专利号: 2020115435622
申请人: 浙江农林大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-04-09
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种副溶血性弧菌检测装置,其特征在于,包括计算机(1)、数据采集器(2)、电化学工作站(3)、第一检测机构和第二检测机构,所述第一检测机构包括第一底座(4),所述第一底座(4)上设有第一检测容器(5)、第一检测模块以及驱动第一检测模块升降的第一升降器(6),所述第一检测模块包括第一导轨(7)、可沿第一导轨(7)滑动的第一滑块(8)以及驱动第一滑块(8)滑动的第一驱动模块(9),所述第一滑块(8)底部连接有第一支架(10),所述第一支架(10)底部从左至右等间距设有m个第一连接座(15),所述第一连接座(15)上可拆卸连接有第一工作电极(11),所述第一导轨(7)底部可拆卸连接有第一对电极(12)、第一参比电极(13),所述第一对电极(12)、第一参比电极(13)位于第一检测容器(5)的正上方,所述第一支架(10)上还设有第一多路数据选择器(14),所述第一多路数据选择器(14)的m个输入端分别与m个第一连接座(15)电连接,所述第一连接座(15)与连接的第一工作电极(11)电连接,所述第二检测机构包括第二底座(16),所述第二底座(16)上设有第二检测容器(17)、第二检测模块以及驱动第二检测模块升降的第二升降器(18),所述第二检测模块包括第二导轨(19)、可沿第二导轨(19)滑动的第二滑块(20)以及驱动第二滑块(20)滑动的第二驱动模块(21),所述第二滑块(20)底部连接有第二支架(22),所述第二支架(22)底部从左至右等间距设有m个第二连接座(27),所述第二连接座(27)上可拆卸连接有第二工作电极(23),所述第二导轨(19)底部可拆卸连接有第二对电极(24)、第二参比电极(25),所述第二对电极(24)、第二参比电极(25)位于第二检测容器(17)的正上方,所述第二支架(22)上还设有第二多路数据选择器(26),所述第二多路数据选择器(26)的m个输入端分别与m个第二连接座(27)电连接,所述第二连接座(27)与连接的第二工作电极(23)电连接,所述电化学工作站(3)分别与第一多路数据选择器(14)的输出端、第一对电极(12)、第一参比电极(13)、第二多路数据选择器(26)的输出端、第二对电极(24)、第二参比电极(25)、数据采集器(2)的输入端电连接,所述计算机(1)分别与数据采集器(2)的输出端、第一升降器(6)、第二升降器(18)、第一驱动模块(9)、第二驱动模块(21)、第一多路数据选择器(14)的控制端、第二多路数据选择器(26)的控制端电连接,所述第一工作电极(11)上未培育副溶血性弧菌抗原,所述第二工作电极(23)上培育有副溶血性弧菌抗原。

2.根据权利要求1所述的一种副溶血性弧菌检测装置,其特征在于,所述第一工作电极(11)、第二工作电极(23)都为铜膜电极,所述第一对电极(12)、第二对电极(24)都为Pt电极,所述第一参比电极(13)、第二参比电极(25)都为Ag/AgCl电极。

3.根据权利要求1所述的一种副溶血性弧菌检测装置,其特征在于,第二工作电极上培育副溶血性弧菌抗原的方法如下:

N1:将银浆SL和海藻酸钠SA按照质量比1∶3比例混合制成10ml溶胶水溶液,接着超声分散15min,称取5mg的氧化石墨烯GO和1mg的氨基功能化的有机金属框架材料NH2‑CuBTC溶解于溶胶水溶液中,超声震荡25min,得到GO/NH2‑CuBTC/SL/SA混合液,取1.5μL的GO/NH2‑CuBTC/SL/SA混合液滴加到第二工作电极表面,于室温干燥5h,在第二工作电极上形成一层GO/NH2‑CuBTC/SL/SA薄膜;

N2:用PBS缓冲液将副溶血性弧菌多克隆抗体溶液稀释300倍后取4μl修饰在干燥后的第二工作电极上,在干燥皿中静置干燥;

N3:取3.5μl副溶血性弧菌抗原溶液滴涂在第二工作电极上,在30℃条件下培育25min,用蒸馏水洗掉第二工作电极上未结合的副溶血性弧菌抗原,晾干。

4.根据权利要求3所述的一种副溶血性弧菌检测装置,其特征在于,所述副溶血性弧菌

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抗原溶液的制备方法如下:将浓度为2×10cfu/ml~2×10cfu/ml的副溶血性弧菌用8%~

12%的福尔马林在25℃~39℃灭活,灭活后离心去除福尔马林,涂布平板进行无菌检验,确定无菌后,沉淀用等体积无菌生理盐水重新悬浮,从而得到副溶血性弧菌抗原溶液。

5.根据权利要求3所述的一种副溶血性弧菌检测装置,其特征在于,所述副溶血性弧菌多克隆抗体溶液的制备方法如下:

兔饲养2周后,耳静脉采血15ml,取出血清作为阴性血清样品;副溶血性弧菌抗原免疫兔,间隔3天进行第二次免疫,再间隔6天加强免疫,加强免疫后第4天颈动脉一次性采血,室温放置45min,转入4℃过夜,次日4℃、5000rpm离心45min得抗血清保存;

将1.5ml亲和层析柱固定于蛋白纯化仪上,用去离子水洗出保护剂溶液,接着用PBS缓冲液平衡柱子,然后将1.5ml抗血清样品上柱,用PBS缓冲液洗脱杂质,最后用柠檬酸缓冲液洗脱副溶血性弧菌多克隆抗体,得到副溶血性弧菌多克隆抗体溶液。

6.一种副溶血性弧菌检测方法,用于权利要求1所述的一种副溶血性弧菌检测装置,其特征在于,包括以下步骤:

S1:配置不同浓度的副溶血性弧菌悬浮液,检测每个浓度的副溶血性弧菌悬浮液对应的特征值Y,将这些值进行拟合得到浓度计算公式:Y=0.2+0.1×LgX,X为副溶血性弧菌的浓度;

S2:取待测副溶血性弧菌悬浮液,检测其对应的特征值Y,根据浓度计算公式:Y=0.2+

0.1×LgX,计算出待测副溶血性弧菌悬浮液的浓度。

7.根据权利要求6所述的一种副溶血性弧菌检测方法,其特征在于,所述检测某个浓度的副溶血性弧菌悬浮液对应的特征值Y的方法包括以下步骤:M1:将第一检测模块上的m个未参与检测过的第一工作电极上都滴加2.5μl该浓度的副溶血性弧菌悬浮液并静置25分钟,将第二检测模块上的m个未参与检测过的第二工作电极上都滴加2.5μl该浓度的副溶血性弧菌悬浮液并静置25分钟;

M2:采用同样方法对该浓度的副溶血性弧菌悬浮液进行m次检测,每次检测的检测步骤如下:

将第一对电极、第一参比电极、未参与检测过的第一工作电极插入第一检测容器内的缓冲溶液中,第一对电极、第一参比电极、未参与检测过的第一工作电极构成第一电化学传感器阵列;

将第二对电极、第二参比电极、未参与检测过的第二工作电极插入第二检测容器内的缓冲溶液中,第二对电极、第二参比电极、未参与检测过的第二工作电极构成第二电化学传感器阵列;

采用循环伏安法从小到大依次切换n种不同的扫描速率进行检测,得到n个还原峰电流差值ΔIpw1、ΔIpw2…ΔIpwn,ΔIpwn=Ip1wn‑Ip2wn,ΔIpwn为第w次检测中第n种扫描速率下的还原峰电流差值,Ip1wn为第w次检测中第n种扫描速率下第一电化学传感器阵列对应的还原峰电流值,Ip2wn为第w次检测中第n种扫描速率下第二电化学传感器阵列对应的还原峰电流值,1≤w≤m;

M3:根据m次检测的检测数据构建出特征矩阵D,M4:将特征矩阵D的每行数据进行二次样条插值,得到m个与每行数据对应的曲线x(t),对m个曲线x(t)进行同样的数据处理,得到m个特征值F,对每个曲线x(t)进行的数据处理包括以下步骤:将x(t)带入非线性定向饱和共振模型中,平缓反馈级联稳态势函数:

检测信号载入分量ing(t)=cos(kt+η)+x(t),其中,t为插值变量,k为实参数,η为实参数,nois(t)为功率谱密度函数不平坦的有色噪声,P为实参数,Q为实参数,a、b、c为实数,δ为平缓延时参数,调节t的值,非线性定向饱和共振模型在t=tr点位达到共振,计算共振状态的特征值F:M5:将m个特征值F取平均,得到的平均值即为特征值Y的值。

8.根据权利要求7所述的一种副溶血性弧菌检测方法,其特征在于,所述n种不同的扫描速率包括50mV/s、100mV/s、200mV/s、300mV/s、400mV/s、500mV/s。