1.一种快速检测MS‑222的磁性免疫层析试纸条,其特征在于,包括底板及底板上依次粘贴的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫;
所述的硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线;检测线上包被3‑氨基苯甲酸‑载体蛋白完全抗原,质控线上包被羊抗鼠IgG。
2.权利要求1所述的快速检测MS‑222的磁性免疫层析试纸条,其特征在于,3‑氨基苯甲酸‑载体蛋白完全抗原是指以为半抗原、BSA或OVA为载体蛋白合成的偶联物;3‑氨基苯甲酸与载体蛋白用1‑乙基‑3‑二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺偶联,或者3‑氨基苯甲酸与载体蛋白用三乙胺和氯甲酸异丁酯偶联。
3.权利要求2所述的快速检测MS‑222的磁性免疫层析试纸条,其特征在于,3‑氨基苯甲酸‑载体蛋白完全抗原的制备方法包括以下步骤:
1)活化:3‑氨基苯甲酸用N,N‑二甲基苯胺或N,N‑二甲基甲酰胺溶解至浓度10‑60mg/mL,加入2%‑5%体积比的三乙胺,2‑8℃反应10‑20min,随后加入0.5%‑1%体积比氯甲酸异丁酯低温反应1‑3h;或者,
3‑氨基苯甲酸用N,N‑二甲基苯胺或N,N‑二甲基甲酰胺溶解,加入质量比为1:1‑2的1‑乙基‑3‑二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺,3‑氨基苯甲酸与1‑乙基‑
3‑二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐用量比为1:1‑2;反应体系中3‑氨基苯甲酸浓度为10‑
60mg/mL;
2)偶联:加入BSA或OVA于上述溶液,过夜反应8‑12h,BSA或OVA与3‑氨基苯甲酸质量比为1:1.5‑2;
3)纯化:将上述偶联物置于20‑40kD透析袋中,用pH=7.0‑7.4的磷酸盐缓冲液透析。
4.一种快速检测MS‑222的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)将待测样品与磁纳米探针混合后反应1‑30min;所述的磁纳米探针为偶联了MS‑222单抗的超顺磁性纳米颗粒;
(2)加入层析液充分混匀5‑60s,滴加到权利要求1‑3任一项所述至磁性免疫层析试纸条的样品垫上;
(3)定性或定量判断结果。
5.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,步骤(1)所述的磁纳米探针制备方法为,用1‑乙基‑3‑二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺将超顺磁性纳米颗粒与MS‑222单抗共价连接。
6.根据权利要求5所述的检测方法,其特征在于,所述的超顺磁性纳米颗粒的粒径为
100‑300nm。
7.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,步骤(2)所述的层析液是含5%‑20%质量比BSA和1%‑5%体积比吐温‑20的PBS缓冲液,pH=7.0‑8.0。
8.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,步骤(3)的定性判断结果方法为:比较样品与阴性对照检测线的颜色深度判定阴阳性结果,若样品检测线的颜色接近或深于阴性对照则为阴性结果,检测线颜色浅于阴性对照或者没有显色则为阳性结果;
步骤(3)的定量判断结果方法为仪器定量测定,使用磁信号分析仪测定检测线和质控线上结合的磁珠含量,并计算两者比值T/C,根据样品与阴性对照间T/C的比值B/B0建立标准曲线,由此计算出样品中MS‑222的含量。
9.根据权利要求4所述的检测方法,其特征在于,步骤(2)中磁纳米探针的制备方法包括以下步骤:
A)取超顺磁性磁纳米颗粒用活化缓冲液清洗;
B)加入质量比为1:1‑2的EDC和NHS加入含有磁珠的离心管中,垂直旋转混匀10~
60min;EDC与超顺磁性磁纳米颗粒的用量比为0.01‑0.1:1;
C)加入MS‑222单抗,充分振荡,垂直旋转混匀1‑5h;MS‑222单抗与超顺磁性磁纳米颗粒用量比为0.005‑0.1:1。
D)用BSA将上述磁纳米探针表面未反应的基团封闭。
10.一种快速检测MS‑222的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1‑3任一项所述的磁性免疫层析试纸条和磁纳米探针;所述的磁纳米探针为偶联了MS‑222单抗的超顺磁性纳米颗粒。