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专利号: 2020114497265
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种全细胞转化制备(‑)γ‑内酰胺的方法,其特征在于,以重组大肠杆菌为细胞催化剂,在含有底物文斯内酯的反应体系中反应,所述重组大肠杆菌表达了来源于尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的(+)γ‑内酰胺酶,所述(+)γ‑内酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,所述重组大肠杆菌以pET28a、pET32a、pET41a、pQE80L、pET20b、或pBAD为表达载体。

3.如权利要求1所述的方法,其特征在于,编码所述(+)γ‑内酰胺酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.如权利要求3所述的方法,其特征在于,所述重组大肠杆菌在反应体系中的细胞浓度为1 10g/L。

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5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述文斯内酯的浓度为5 500mmol/L。

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6.如权利要求5所述的方法,其特征在于,反应条件为:温度30 80℃,pH 6 8。

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7.一种酶法制备(‑)γ‑内酰胺的方法,其特征在于,应用重组大肠杆菌生产(+)γ‑内酰胺酶,再将生产的(+)γ‑内酰胺酶用于文斯内酯的酶催化反应,所述重组大肠杆菌表达了来源于尖孢镰刀菌的(+)γ‑内酰胺酶,所述(+)γ‑内酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,将重组大肠杆菌接种至培养基中培养至OD600达0.5 0.7,添加IPTG ,在16 30℃诱导培养8 24 h后离心收集菌体,并细胞破碎获得(+)~ ~ ~γ‑内酰胺酶粗酶液。

9.如权利要求7或8所述的方法,其特征在于,所述的文斯内酯的浓度为5  500 mmol/~L。

10.如权利要求9所述的方法,其特征在于,所述的(+)γ‑内酰胺酶的用量为1 10 g/L。

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11.如权利要求10所述的方法,其特征在于,反应条件为:pH 6 8,温度为30 80℃。

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