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专利号: 2020112733812
申请人: 江苏海洋大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-12-01
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种来自海洋的屎肠球菌(Enterococcus faecium)R-NTR-1,其特征在于:其保藏号为CCTCC NO:M 2020654。

2.权利要求1所述的屎肠球菌(Enterococcus faecium)R-NTR-1的筛选方法,其特征在于,其步骤如下:(1)分离纯化:取适量采集得到的海泥、海水样品,放入装有45ml富集培养基的50ml离心管中,加入5ml无菌液体石蜡,28℃静置培养24h;培养基混浊后,取样品进行梯度稀释,分别取10-5、10-6、10-7 3个稀释浓度样品100μL涂布于直径9cm的MRS平板上,28℃恒温培养

24h,挑取具有溶钙圈的菌落,于MRS平板上进行三区划线纯化至单菌落,到得乳酸菌菌株若干个;

(2)降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选

将乳酸菌不同菌株的菌悬液5×107CFU/mL按5%V/V接种量接种至装有25mL亚硝酸盐降解菌筛选培养基的50mL离心管中,28℃静置培养24h;发酵液于4℃、8000r/min条件下离心

10min,采用盐酸萘乙二胺分光光度法,测定不同菌株上清液的OD538;根据亚硝酸盐标准曲线计算不同菌株发酵液中的亚硝酸盐浓度,以未接种菌液的空白培养基为对照,计算不同菌株的亚硝酸盐降解率;每一菌株为一处理,每个菌株接种至3个离心管,为3次重复;筛选得到亚硝酸盐降解率最高的降解率为70.54%菌株R-NTR-1;

(3)降解氨氮作用的测定

将乳酸菌不同菌株的菌悬液5×107CFU/mL按5%V/V接种量接种至装有25mL亚硝酸盐降解菌筛选培养基的50mL离心管中,28℃静置培养24h;发酵液于4℃、8000r/min条件下离心

10min,采用靛酚蓝分光光度法测定不同菌株上清液的OD637,根据标准曲线计算不同菌株发酵液中的氨氮浓度,以未接种的筛选培养基作为对照,计算不同菌株的氨氮降解率;每一菌株为一处理,每个菌株接种至3个离心管,为3次重复;确定氨氮降解率最高菌株为R-NTR-1且其降解率为34.95%;

(4)经鉴定,乳酸菌R-NTR-1菌株符合肠球菌属(Enterococcus)的特征,将R-NTR-1的

16S rRNA基因序列与NCBI中的序列进行比对,R-NTR-1菌株的16S rRNA与屎肠球菌的16S rRNA基因序列相似性为99.86%,确定R-NTR-1菌株为屎肠球菌(Enterococcus faecium)。

3.权利要求1所述的屎肠球菌R-NTR-1的用途,其特征在于,所述的的用途为将屎肠球菌R-NTR-1用作亚硝酸盐与/或氨氮降解菌剂。