1.一种电化学发光酶联免疫传感器,其特征在于:由以下方法制备而成:首先在氧化铟锡电极上合成介孔二氧化硅,再将介孔二氧化硅电极和纸质盖片贴合,然后将生物素标记抗体、碱性磷酸酶标记的抗体,与抗原反应,形成抗原抗体复合物,再加入亲和素磁珠分离所述抗原抗体复合物,最后再加入底物磷酸苯二钠反应后,检测生成的苯酚,待测物的含量与生成的苯酚成正比,从而构建成电化学发光酶联免疫传感器。
2.根据权利要求1所述的电化学发光酶联免疫传感器,其特征在于,制备方法包括以下具体步骤:(1)将定制的氧化铟锡电极切割成1-5 cm × 1-5 cm尺寸大小,用含0.1-2 M NaOH的乙醇溶液浸泡1-26 h,依次用丙酮、乙醇和去离子水各超声清洗1-30 min,然后用氮气吹干;
(2)采用溶液生长法在氧化铟锡电极电极上合成介孔二氧化硅:首先称取0.1-0.5 g十六烷基三甲基溴化铵,用10-150 mL去离子水和10-100 mL无水乙醇混合溶液溶解,搅拌至澄清,依次用微量移液器加入1-50 浓氨水、10-150 硅酸四乙酯,搅拌1-30 min;将所述溶液移入染色盒中;最后将预处理好的氧化铟锡玻璃放入染色盒中,封口,在30-150℃水浴1-48 h;
水浴结束后,取出生长了介孔二氧化硅的氧化铟锡电极玻璃,用去离子水冲洗干净,
50-300℃鼓风干燥5-48 h;取出冷却后,将其放入0.1-0.5 M盐酸乙醇溶液搅拌1-30 min,然后用氮气吹干,制得SANs/ITO电极;
(3)将纸质盖片与SANs/ITO电极粘合,制备传感器(SANs-ECL);每个传感器上有1-10个独立的检测单元;每个单元包含1-10个工作电极,与对电极形成1-5个微二电极体系;每个检测单元分别滴加1-15 不同的溶液,在两端施加0.5-3.0 V电压检测;
(4)酶联免疫反应
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1)抗原抗体反应:取10-200 的0.1-1.0 g mL 生物素化抗体、100-200 的-1
10-200 的0.1-1.0 g mL 碱性磷酸酶标记抗体、10-200 各浓度的人免疫球蛋白加入预先用牛血清白蛋白封闭过的离心管内,混匀后37℃温育5-35 min;
2)磁性分离:抗原抗体结束反应后,取50-300 磁珠加入离心管中,摇匀后37℃温育
5-30 min,期间震荡摇匀两次,避免磁珠沉底;反应完成后,磁性分离弃去上清,再用磷酸缓冲盐溶液洗涤1-10次;
3)酶促反应:在装有洗涤后磁珠的离心管内加入酶反应底物50-200 ,37℃震荡温育5-35 min;磁性分离,取上清做电化学发光检测。
3.根据权利要求2所述的电化学发光酶联免疫传感器,其特征在于,步骤(1)中,所述NaOH的乙醇溶液含NaOH 0.5-1.0M。
4.根据权利要求2或3所述的电化学发光酶联免疫传感器,其特征在于,步骤(2)中,所述浸泡的时间为18-24h。
5.根据权利要求2或3或3所述的电化学发光酶联免疫传感器,其特征在于,步骤(2)中,用丙酮、乙醇和去离子水各超声清洗的时间为10-20 min。
6.根据权利要求2-5之一所述的电化学发光酶联免疫传感器,其特征在于,步骤(2)中,称取的十六烷基三甲基溴化铵为0.16 g;所述去离子水为50-100 mL;所述无水乙醇的体积为20-50 mL;所述浓氨水的量为5-20 ,所述浓氨水的浓度为10-50wt.%;所述硅酸四乙酯的量为60-120 ;所述搅拌的时间为10-25 min;所述水浴的温度为40-90℃;所述水浴的时间为10-40h。
7.根据权利要求6所述的电化学发光酶联免疫传感器,其特征在于,所述去离子水60-
80 mL;所述浓氨水的浓度为15-40 wt.%;所述硅酸四乙酯的量为70-100 ;所述搅拌的时间为15-20 min;所述水浴的温度为50-80℃;所述水浴的时间为20-30 h。
8.根据权利要求2-7之一所述的电化学发光酶联免疫传感器,其特征在于,步骤(2)中,所述鼓风干燥的温度为150-200℃;所述鼓风干燥的时间为15-30 h;在盐酸乙醇溶液中搅拌的时间为15-20 min。
9.根据权利要求2-8之一所述的电化学发光酶联免疫传感器,其特征在于,步骤(4)酶联免疫反应的步骤1)中,所述温育的时间为10-30 min;步骤2)中,所述温育的时间为10-25 min,所述磷酸缓冲盐溶液洗涤的次数为4-8次;步骤3)中,所述震荡温育的时间为10-25 min。
10.如权利要求1-9之一所述电化学发光酶联免疫传感器在不同浓度不同临床生物标志物检测中的应用。