1.一种高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜的制备方法,其特征在于,该方法包含:
(1)以丁二酸酐、二异丙基乙基胺和二甲基甲酰胺的混合溶液作为混合液A,将玻璃基底置于所述混合液A中,于25℃反应,使玻璃基底表面被羧酸修饰,得到修饰羧酸的玻璃基底;
(2)将所述修饰羧酸的玻璃基底置于四氯合金酸和氨水的混合液B中,在5~15℃下反应,待反应结束,去除表面的混合液;将玻璃基底置于NaBH4的水溶液中,在5~15℃下反应,促使金离子还原沉积在玻璃基底上,形成晶核,去除表面的残留的金离子,得到金沉积的玻璃基底;
(3)将所述金沉积的玻璃基底置于四氯合金酸和NH2OH的混合液C中,在20~40℃下反应,玻璃基底表面形成金纳米岛状薄膜;然后置于硝酸银、氨水、氢氧化钠和D‑葡萄糖的混合液D中,在20~40℃下反应,在金纳米岛状薄膜表面形成金银合金,以在玻璃基底表面形成金银合金纳米岛状薄膜;
(4)以2‑巯基乙醇、4‑巯基‑1‑丁醇、6‑巯基‑1‑己醇、11‑巯基‑1‑十一醇、16‑巯基十六烷基酸和乙醇的混合溶液作为混合液E,将形成金银合金纳米岛状薄膜的玻璃基底置于该混合液E中,室温下反应,完成在金银合金纳米岛状薄膜表面修饰硫醇基;然后置于1,3‑二环己基碳二亚胺、N‑羟基丁二酰亚胺和二甲基甲酰胺的混合液F中,室温下反应,使羧酸活化;加入8‑arm‑PEG‑NH2、N,N‑二异丙基乙胺和二甲基甲酰胺的混合液G,使8‑arm‑PEG‑NH2与金银合金纳米岛状薄膜上活化的羧酸反应,待反应结束,去除表面的溶液,在玻璃基底上形成含修饰8‑arm‑PEG‑NH2的纳米薄膜;
(5)将经步骤(4)的玻璃基底置于生物素、1,3‑二环己基碳二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺和二甲基甲酰胺的混合液H中,使8‑arm‑PEG‑NH2与生物素在室温下反应,待反应结束后,去除表面的溶液,在玻璃基底上形成修饰生物素的纳米薄膜;
(6)将经步骤(5)的玻璃基底置于37℃的磷酸盐缓冲溶液中,浸泡,待浸泡结束后去除表面的溶液;将streptavidin‑IRDye800溶液滴到经过浸泡的含修饰生物素纳米薄膜的玻璃基底上,在10~38℃反应,反应结束后用磷酸盐吐温缓冲液清洗,在玻璃基底上形成高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜。
2.根据权利要求1所述的高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜的制备方法,其特征在于,所述混合液B中,四氯合金酸、氨水和水的用量比为0.1125~0.3375mmol:0.75mL:
32.25mL;
所述混合液C中,四氯合金酸、NH2OH和水的用量比为0.05~0.15mmol:5mL:43mL;
所述混合液D中,硝酸银、氨水、氢氧化钠、D‑葡萄糖和水的用量比为17~34g:0.25mL:
1mL:1mg:37.75mL;
所述混合液E中,2‑巯基乙醇、4‑巯基‑1‑丁醇、6‑巯基‑1‑己醇、11‑巯基‑1‑十一醇、16‑巯基十六烷基酸和乙醇的用量比为1~3μL:4~6μL:5~7μL:10~20mg:15~30mg:500mL;
所述混合液F中,1,3‑二环己基碳二亚胺、N‑羟基丁二酰亚胺和二甲基甲酰胺的用量比为51.6mg:25~35mg:25mL;
所述混合液G中,8‑arm‑PEG‑NH2、N,N‑二异丙基乙胺和二甲基甲酰胺的用量比为50~
65mg:173~175μL:10mL;
所述混合液H中,生物素、1,3‑二环己基碳二亚胺和N‑羟基丁二酰亚胺和二甲基甲酰胺的用量比为50~75mg:51.6mg:28.8mg:25mL;
所述8‑arm‑PEG‑NH2与生物素的用量比为50~65mg:50~75mg。
3.根据权利要求1所述的高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜的制备方法,其特征在于,所述混合液A中,丁二酸酐、二异丙基乙基胺和二甲基甲酰胺的用量比为0.45g:
0.606mL:25mL。
4.根据权利要求1所述的高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜的制备方法,其特征在于,所述streptavidin‑IRDye800溶液的浓度为0.08~0.18μg/mL,采用磷酸缓冲盐配制。
5.根据权利要求1所述的高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜的制备方法,其特征在于,在步骤(2)中,所述NaBH4与四氯合金酸的摩尔比比为1~2:1.125~3.375。
6.根据权利要求1所述的高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜的制备方法,其特征在于,在步骤(2)中,将所述修饰羧酸的玻璃基底置于混合液B中,在5~15℃下反应
20min;将玻璃基底置于NaBH4的水溶液中,在5~15℃下反应1min。
7.根据权利要求1所述的高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜的制备方法,其特征在于,在步骤(3)中,将所述金沉积的玻璃基底置于混合液C中,在20~40℃下反应5~
12min;然后置于混合液D中,在20~40℃下反应5~12min。
8.根据权利要求1所述的高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜的制备方法,其特征在于,在步骤(4)中,将形成金银合金纳米岛状薄膜的玻璃基底置于混合液E中,室温下于某一转速下反应16h。
9.根据权利要求1所述的高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜的制备方法,其特征在于,在步骤(5)中,将经步骤(4)的玻璃基底置于混合液H中,在室温下反应16h;在步骤(6)中,将经步骤(5)的玻璃基底置于磷酸盐缓冲溶液中,浸泡1h;将streptavidin‑IRDye800溶液滴到经过浸泡的含修饰生物素纳米薄膜的玻璃基底上,在10~38℃反应0.5~1.5h。
10.一种高荧光增强效果的金银合金纳米岛状薄膜,其特征在于,该薄膜经由如权利要求1‑9中任意一项所述的制备方法获得。