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专利号: 2020109311923
申请人: 江南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种制备稳定型钙离子螯合肽的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

(1)黑豆蛋白提取:利用碱溶酸沉法提取黑豆中的蛋白质;

(2)物理场预处理:将步骤(1)中得到的蛋白粉进行物理场预处理,物理场预处理的方法包括热处理或超声处理;

(3)黑豆蛋白水解液的制备:将步骤(2)中处理后的蛋白配制成质量分数为1%~10%的蛋白溶液,调节溶液pH值,然后加入蛋白酶,保温震荡反应,反应结束后水解液经水浴灭酶、冷却,调节溶液pH至中性后离心取上清液,上清液经滤膜过滤,即得到含钙离子螯合肽的黑豆蛋白水解液;

(4)HPLC指纹图谱的构建:按照步骤(3)中制备黑豆蛋白水解液的方法,制备不同水解条件下的黑豆蛋白水解液,利用高效液相色谱技术对不同的黑豆蛋白水解液进行分离纯化,得到共有成分峰,收集各共有成分峰的物质,后经氮吹、脱盐、冷冻干燥的处理,即得到稳定型钙离子螯合肽;

所述钙离子螯合肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2和/或SEQ ID No.3所示。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中所述碱溶酸沉法具体为:黑豆粉脱脂后加入碱液搅拌1~2h,然后经离心收集上清液,向上清液中加入酸调节pH值至4~5以沉降蛋白质,后经离心取蛋白质沉淀,重悬、冻干得到黑豆蛋白。

3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)中所述物理场预处理的方法包括:采用热处理手段微波、红外、烘箱,处理温度为100~150℃,处理时间为10~30min;采用超声处理,其处理功率为70~100Hz,处理时间为10~30min。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中所述蛋白酶为碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶中的任意一种。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述蛋白酶为碱性蛋白酶时,水解温度为

45~65℃,pH为8.0~10.0,水解时间为1~8小时;所述蛋白酶为菠萝蛋白酶时,水解温度为

45~65℃,pH为6.0~8.0,水解时间为1~8小时;所述蛋白酶为无花果蛋白酶时,水解温度为50~70℃,pH为5.0~7.0,水解时间为1~8小时;所述蛋白酶为胰蛋白酶时,水解温度为

25~45℃,pH为7.0~9.0,水解时间为1~8小时;所述蛋白酶为胰酶时,水解温度为25~40℃,pH为7.0~9.0,水解时间为1~8小时;所述蛋白酶为风味蛋白酶时,水解温度为45~65℃,pH为6.0~8.0,水解时间为1~8小时;所述蛋白酶为木瓜蛋白酶时,水解温度为45~65℃,pH为6.0~8.0,水解时间为1~8小时;所述蛋白酶为胃蛋白酶时,水解温度25~45℃,pH为1.0~3.0,水解时间为1~8小时。

6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中所述蛋白酶为无花果蛋白酶。

7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中高效液相色谱技术中使用的色谱柱为C18柱。

8.一种制备稳定型钙离子螯合肽的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:

(1)黑豆蛋白提取:利用碱溶酸沉法提取黑豆中的蛋白质;

(2)物理场预处理:将步骤(1)中得到的蛋白粉进行物理场预处理,物理场预处理的方法包括热处理或超声处理;

(3)黑豆蛋白水解液的制备:将步骤(2)中处理后的蛋白配制成质量分数为5%的蛋白溶液,调节溶液pH值为5.2~6.44,然后加入1~2%的无花果蛋白酶,于65~70℃下保温震荡反应,反应结束后水解液经水浴灭酶、冷却,调节溶液pH至中性后离心取上清液,上清液经滤膜过滤,即得到含钙离子螯合肽的黑豆蛋白水解液;

(4)HPLC指纹图谱的构建:利用高效液相色谱技术对步骤(3)制备的黑豆蛋白水解液进行分离纯化,收集保留时间为4.8~5.8min的组分,后经氮吹、脱盐、冷冻干燥的处理,即得到稳定型钙离子螯合肽;

所述钙离子螯合肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2和/或SEQ ID No.3所示。

9.权利要求1~8任一项所述方法制备得到的钙离子螯合肽在食品领域的应用。