1.一种来源于白色杆菌(Albibactersp.)CCTCC NO:M2015650的重组酯酶,其特征在于所述重组酯酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。
2.一种权利要求1所述重组酯酶的编码基因,其特征在于所述编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。
3.一种由权利要求2所述编码基因构建的重组载体。
4.一种由权利要求3所述重组载体转化获得的重组基因工程菌。
5.一种权利要求1所述重组酯酶在催化R,S-甲霜灵不对称水解制备R-甲霜灵中的应用。
6.如权利要求5所述的应用,其特征在于所述的应用为:以含重组酯酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体用pH8.0磷酸盐缓冲液悬浮,高压匀浆破碎、离心,取上清液即为粗酶液;以粗酶液为催化剂,以R,S-甲霜灵为底物,以pH8.0磷酸盐缓冲液为反应介质构成反应体系,在20-60℃、120-240rpm条件下进行水解反应,反应完全后,获得含R-甲霜灵酸的混合液,将混合液分离纯化,获得R-甲霜灵酸,再将R-甲霜灵酸与甲醇在氯化亚砜催化下生成R-甲霜灵。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述催化剂的用量以破碎前湿菌体的重量计为1.5-3g/L反应体系,所述底物终浓度为0.5-35g/L反应体系。
8.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述催化剂按如下方法制备:将含重组酯酶编码基因的工程菌接种在含卡那霉素50μg/mL的LB液体培养基中,37℃,180r/min培养至菌液OD600为0.5~0.8,添加IPTG至终浓度为0.6mmol/L,25℃、180r/min诱导培养10h,将菌液在4℃、8000r/min离心10min,弃上清液;取沉淀细胞即湿菌体悬浮于100mmol/L的pH8.0 Tris-HCl缓冲液中,4℃下高压匀浆破碎,12000r/min离心20min,取上清液,获得粗酶液;所述悬浮用缓冲液体积用量以湿菌体重量计为50~100ml/g。
9.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述R-甲霜灵按如下方法制备:取R-甲霜灵酸,溶于无水甲醇中,冰浴滴加二氯亚砜,滴加完毕后冰浴反应10min,然后回流反应4h,旋蒸浓缩至粘稠的膏状体;将旋蒸产物溶于乙酸乙酯,用质量浓度5%Na2CO3水溶液洗涤2次,去离子水洗涤1次,有机相加入无水硫酸镁除水,过滤后旋蒸,得到R-甲霜灵;所述无水甲醇体积用量以R-甲霜灵酸重量计为8ml/g;所述二氯亚砜与R-甲霜灵酸物质的量只比为1:
1.1。