1.白色杆菌Albibacter sp.zjut528,保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏日期为
2015年10月29日,保藏编号CCTCC NO:M2015650,保藏地址:中国,武汉,武汉大学,邮编
430072。
2.一种权利要求1所述白色杆菌zjut528在拆分甲霜灵中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于所述的应用以白色杆菌zjut528经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以外消旋甲霜灵为底物,以异丙醇为助溶剂,以pH7.5~8.5的磷酸缓冲液为反应介质构成反应体系,在30~35℃、150~200r/min条件下进行催化反应,反应完全后,将反应液分离纯化,获得(R)-甲霜灵酸。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述催化剂用量以湿菌体重量计为25~40g/L反应体系,所述底物外消旋甲霜灵加入量为30~50mmol/L反应体系,所述助溶剂加入终浓度为10~20ml/L反应体系。
5.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述湿菌体的制备方法为:
(1)将白色杆菌zjut528接种至斜面培养基,在30℃培养2~3天,获得斜面菌体;所述斜面培养基终浓度组成:NaCl0.5g/L,MgSO4·7H2O1.0g/L,K2HPO4 1.0g/L,NH4NO3 1.0g/L,酵母浸出粉5.0g/L,葡萄糖5.0g/L,琼脂20g/L,溶剂为水,pH值自然;
(2)将斜面菌体接种至种子培养基,在30℃培养48h,获得种子液;所述种子培养基终浓度组成为:NaCl0.5g/L,MgSO4·7H2O1.0g/L,K2HPO4 1.0g/L,NH4NO3 1.0g/L,酵母浸出粉
5.0g/L,葡萄糖5.0g/L,溶剂为水,pH值自然;
(3)将种子液以体积浓度1%~10%接种量接种至发酵培养基,在30℃、180r/min的条件下培养48h,将发酵液离心,弃上清液,获得湿菌体;所述发酵培养基终浓度组成:NaCl0.5g/L,MgSO4·7H2O1.0g/L,K2HPO4 1.0g/L,NH4NO3 1.0g/L,酵母浸出粉5.0g/L,葡萄糖5.0g/L,外消旋甲霜灵1.0g/L,甲醇5.0g/L,甲醇在培养基灭菌后,接种前加入,溶剂为水,pH值自然。
6.如权利要求3所述的应用,其特征在于所述反应液分离纯化的方法为:反应结束后,用氨水调节反应液的pH值至8-9,加入等体积的乙酸乙酯萃取分层,去除有机相a得到水相a,将水相a用盐酸调节pH值为3~5,加入等体积的乙酸乙酯萃取分层,去除水相b得到有机相b,再将有机相b在35℃~60℃旋转蒸发除去乙酸乙酯,获得(R)-甲霜灵酸。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述( R)-甲霜灵酸制备( R)-甲霜灵的方法为:取(R)-甲霜灵酸溶于无水甲醇中,冰浴滴加二氯亚砜,滴加完毕后冰浴反应10min,然后回流反应4h,旋蒸浓缩至无液体流出,获得浓缩液;将浓缩液溶于乙酸乙酯,用质量浓度5%Na2CO3水溶液洗涤2次,去离子水洗涤1次,去除洗涤液后加入无水硫酸镁除水,过滤后旋蒸至干,得到(R)-甲霜灵;所述二氯亚砜与(R)-甲霜灵酸物质的量之比为1.1:1。