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专利号: 2020108708771
申请人: 湖南农业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于二维液相色谱‑紫外衍生法同时测定生物基质中5种氨基酸类神经递质的方法,其特征在于:将生物样本进行柱前衍生预处理得到待测溶液,所述待测溶液通过二维液相色谱系统检测并定量分析天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、牛磺酸和γ‑氨基丁酸5种氨基酸类神经递质目标物;

所述二维液相色谱系统检测条件为:一维色谱柱(萃取柱):SNCB 50 mm*4.6 mm*5μm柱;

二维色谱柱(分析柱):SBR3 200mm*4.6mm*5μm柱;

进样体积:100 200µL;

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流速:0.8 1.2 mL/min;

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柱温:38 42℃;

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流动相:

A泵:水相为0.02 mol/L、pH=6.8 6.9的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠缓冲液,有机相为甲~醇‑乙腈;水相和有机相体积比为2 3:1;

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C泵: 流动相由甲醇和0.02 mol/L、pH=6.8 6.9的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠缓冲溶液~按体积比15 20:85 80组成;

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 A泵的梯度洗脱程序:从目标物转移到二维色谱柱时开始;1 5min,水相由71vol%匀速~降至55vol%;5 13min,水相保持55vol%;13 18min,水相匀速升至71vol%;

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UV检测器472 482nm;

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所述生物样本为猪血浆、羊血浆、大鼠血清、猪脑组织或大鼠脑组织;

猪血浆、羊血浆及大鼠血清的柱前衍生预处理方法为:将猪血浆、羊血浆或大鼠血清与乙腈/生理盐水混合物混合,在冷冻条件下,进行离心处理,取上层清液进行衍生处理,在上层清液中依次加入四硼酸钾溶液和NBD‑F乙腈溶液,在55 65℃温度下振荡混匀8 12min,冷~ ~却后,再加入Mili‑Q水,混匀得到待测溶液;

猪脑组织或大鼠脑组织的柱前衍生预处理的方法:将猪脑组织或大鼠脑组织与冷冻生理盐水进行均质处理,所得均质液与PBS‑乙腈混合液涡旋混合后,在冷冻条件下,进行离心处理,取上层清液进行衍生处理,在上层清液中依次加入四硼酸钾溶液和NBD‑F乙腈溶液,在55 65℃温度下振荡混匀8 12min,冷却后,在加入Mili‑Q水,混匀得到待测溶液。

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2.根据权利要求1所述的一种基于二维液相色谱‑紫外衍生法同时测定生物基质中5种氨基酸类神经递质的方法,其特征在于:猪血浆、羊血浆或大鼠血清与乙腈/生理盐水混合物的体积比为1:8 10;

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所述乙腈/生理盐水混合物由乙腈与生理盐水按体积比700 800:200 300组成;

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所述冷冻条件为温度小于5℃;

所述离心的转速为14000 15000r/min,时间为8 12min。

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3.根据权利要求1所述的一种基于二维液相色谱‑紫外衍生法同时测定生物基质中5种氨基酸类神经递质的方法,其特征在于:猪脑组织或大鼠脑组织与冷冻生理盐水的质量体积比为0.8 1.2g:0.4 0.6mL;

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所述PBS‑乙腈混合液由pH=7.4的PBS与乙腈按体积比700 800:200 300组成;

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所述冷冻条件为温度小于5℃;

所述离心的转速为14000 15000r/min,时间为8 12min。

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4.根据权利要求3所述的一种基于二维液相色谱‑紫外衍生法同时测定生物基质中5种氨基酸类神经递质的方法,其特征在于:上层清液与四硼酸钾溶液的体积比为1:3 4;所述四硼酸钾溶液的浓度为8 mmol/L~ ~

12mmol/L,pH=7.2 7.8;

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上层清液与NBD‑F乙腈溶液的体积比为1:0.4 0.6;所述NBD‑F乙腈溶液的浓度为8 ~mmol/L 12mmol/L;

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上层清液与Mili‑Q水的体积比为1:4 6。

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