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专利号: 2020108487641
申请人: 浙江工业大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-07-29
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种利用土星轮头酵母制备(S)‑[3,5‑二(三氟甲基)苯基]乙醇的方法,其特征在于所述的方法为:以土星轮头酵母(Cyberlindnera saturnus)CCTCC NO: M2019215经发酵培养获得的湿菌体为酶源,以3,5‑双三氟甲基苯乙酮为底物,以葡萄糖为辅助底物,于0.1 M,pH 7.0的Na2HPO4‑NaH2PO4缓冲液中构成转化体系,在25~45℃、100‑200rpm条件下进行转化反应30‑36h,反应结束后将转化反应液进行分离纯化,获得(S)‑[3,5‑二(三氟甲基)苯基]乙醇;所述湿菌体的用量以缓冲液体积计为50 g/L,所述底物的初始加量以缓冲液体积计为25.61‑51.23 g/L;所述葡萄糖添加量为50 g/L。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述转化体系由酶源、底物、辅助底物和天然低共熔溶剂组成;所述天然低共熔溶剂的种类及摩尔比为下列之一:甜菜碱:葡萄糖:甘油=

1:1:1、甜菜碱:赖氨酸=1:2、L‑肉碱:赖氨酸=1:2、L‑脯氨酸:赖氨酸=1:1、甜菜碱:谷氨酸=

1:1、L‑脯氨酸:赖氨酸=1:1、L‑脯氨酸:异丙醇=1:1、甜菜碱:异丙醇=1:1、甜菜碱:丙氨酸=

1:1。

3.如权利要求2所述的方法,其特征在于所述天然低共熔溶剂质量加量以缓冲液体积计为5~20 g/L。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述转化体系由酶源、底物、辅助底物、天然低共熔溶剂和表面活性剂组成,所述表面活性剂为吐温‑80,吐温‑60,吐温‑20,司盘‑80或司盘‑20。

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于所述表面活性剂的添加量以缓冲液体积计为1~15g/L。

6.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述酶源按如下方法制备:(1)斜面培养:将土星轮头酵母(Cyberlindnera saturnus)CCTCC NO: M2019215接种至斜面培养基,30℃培养

24 h,获得斜面菌种;斜面培养基终浓度组成为:葡萄糖15 g/L,蛋白胨7.5 g/L,酵母膏6 g/L,(NH4)2SO4 3 g/L,KH2PO4 1.5 g/L,NaCl 0.75 g/L,MgSO4·7H2O 0.75 g/L,琼脂粉15~

20 g/L,溶剂为水,pH 6.5;

(2)种子培养:将步骤(1)制备得到的斜面菌种接种至种子培养基中,25 30℃、150 250 ~ ~

rpm培养10 24 h,获得种子液;种子培养基终浓度组成为:葡萄糖15 g/L,蛋白胨20 g/L,酵~

母膏10 g/L,(NH4)2SO4 2 g/L,KH2PO4 2 g/L,NaCl 1 g/L,MgSO4·7H2O 0.5 g/L,溶剂为水,pH 6.5;

(3)发酵培养:将步骤(2)制备得到的种子液以体积浓度8%的接种量接种至发酵培养基中,初始pH值7.5,摇瓶装液量为90 mL/250 mL锥形瓶,培养温度30℃、摇床转速200 rpm,培养时间32 h,发酵结束后,将发酵液离心,所得沉淀用0.1 M、pH 7.5磷酸缓冲液洗涤,收集湿菌体,即为酶源;发酵培养基终浓度组成为:葡萄糖34.36 g/L,酵母膏14.89 g/L,NH4Cl 

30.34 g/L,KH2PO4 1.01 g/L,CaCl2 0.11 g/L,溶剂为水,pH 7.5。