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专利号: 2020107765870
申请人: 重庆博视知识产权服务有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-05-20
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种用于检测透明质酸酶HAase的纳米复合材料,其特征在于:该纳米复合材料基于HAase‑HA生物识别作用及自催化循环放大策略,采用细胞毒性低、生物相容性好的空心金纳米材料载带信号分子,利用透明质酸HA作为生物识别分子构建分子锁;

所述纳米复合材料用于检测膀胱癌患者尿液中的HAase的方法,包括如下步骤:(1)取从医院获得的健康人尿液、膀胱癌病人尿液各20 μL,另取健康人尿液、膀胱癌病人尿液通过标准加入法制备成比原尿液浓度增加10 U/mL HAase的尿液各20 μL,分别加入o到所述的纳米复合材料中,37  C摇床反应4.0 h;

(2)磁分离,取上清液用pH=7.4的PBS缓冲溶液稀释至200 μL,并用0.1 mol/L的盐酸溶液调pH为5.0进行荧光检测,激发波长553 nm,狭缝宽度5.0 nm;

所述的用于检测透明质酸酶HAase的纳米复合材料的制备步骤如下:o

(1)在清洗后的巯基磁珠中加入空心金纳米载体溶液200 μL,37  C摇床反应12.0 h;

‑5  o

(2)磁分离、清洗后加入终浓度为1.0×10 mol/L的RhB的PBS溶液100 μL,37  C摇床反应12.0 h;

(3)磁分离、清洗后制得纳米载体复合物,保存备用;

(4)在0.5 mL 100 mg/mL HA水溶液中加入200 μL13 mg/mL羰基二咪唑的DMF溶液,室温反应2.0 h后,加入100 μL含有25 mg NH2‑PEG‑SH的水溶液和10 μL三甲胺溶液,搅拌过夜;

(5)经透析膜纯化,冷冻干燥,制得复合物HA‑PEG‑SH;

(6)将0.5 mL 2.4 mg/mL HA‑PEG‑SH的水溶液加入到步骤 (3) 制得的纳米载体复合物中,常温搅拌2.0 h;

(7)磁分离、清洗,最终制得用于检测HAase的纳米复合材料。