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专利号: 2020107765866
申请人: 重庆博视知识产权服务有限公司
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种透明质酸酶HAase的细胞荧光成像方法,其特征在于:该方法采用的纳米复合材料是基于HAase‑HA生物识别作用及自催化循环放大策略,所述的纳米复合材料采用细胞毒性低、生物相容性好的空心金纳米材料载带信号分子,利用透明质酸HA作为生物识别分子构建分子锁;

所述纳米复合材料的制备方法,包括如下步骤:

‑5

 (1)在200μL空心金纳米载体溶液中加入2μL终浓度为1.0×10 mol/L的罗丹明B溶液,

37℃摇床反应12.0h,离心、清洗后保存备用;

 (2)在0.5mL 100mg/mLHA水溶液中加入200μL 13mg/mL羰基二咪唑的DMF溶液,室温反应2.0h后,加入100μL含有25mgNH2‑PEG‑SH的水溶液和10μL三甲胺溶液,搅拌过夜;

 (3)经透析膜纯化,冷冻干燥后制得复合物HA‑PEG‑SH;

 (4)将0.5mL 2.4mg/mL HA‑PEG‑SH的水溶液加入到步骤(1)制得的纳米载体复合物中,常温搅拌2.0h;

 (5)离心、清洗,最终制得用于肿瘤细胞内HAase的荧光成像的纳米复合材料;

该方法用于非诊断目的的肿瘤细胞的荧光成像,包括以下步骤:(1)将所述纳米复合材料的PBS稀释液加入到已经培养好的Hela细胞的培养皿中,37℃孵育2.0h;

(2)作为对照实验,将另一份Hela细胞提前用HAase抑制剂孵育2.0h后进行相同实验;

(3)将实验组与对照组做激光共聚焦扫描成像,激发波长选择559nm。