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专利号: 2020106914736
申请人: 西南大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-06-16
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.家蚕丝心蛋白重链表达系统,其特征在于:所述家蚕丝心蛋白重链表达系统含有目的基因表达框,所述表达框5’端为丝心蛋白重链启动子信号肽序列Fib-H P(s);3’端为截短轻链结合位点LBS(s);所述丝心蛋白重链启动子信号肽序列Fib-H P(s)的核苷酸如SEQ ID NO.1所示;所述截短轻链结合位点LBS(s)的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.含有权利要求1所述家蚕丝心蛋白重链表达系统的重组载体。

3.根据权利要求2所述的重组载体,其特征在于:所述家蚕丝心蛋白重链表达系统由含有目的基因表达框通过BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点连入pSLfa1180fa载体而得。

4.根据权利要求2所述的重组载体,其特征在于:所述家蚕丝心蛋白重链表达系统由含有目的基因表达框连入pBac[3×P3DsRedaf]载体的Asc Ⅰ和Fse Ⅰ酶切位点处。

5.权利要求3所述重组载体的制备方法,其特征在于:所述重组载体由含有目的基因表达框连入pSLfa1180fa载体的BamH Ⅰ和HindⅢ酶切位点处而得。

6.根据权利要求5所述重组载体的制备方法,其特征在于,制备方法如下:先将截短轻链结合位点LBS(s)通过BamHI和SalI酶切位点连入pSLfa1180fa载体获得pSL-LBS(s)质粒,再将目的基因通过XbaI和BamHI连入pSL-LBS(s)质粒获得含目的基因的过渡载体,最后将丝心蛋白重链启动子信号肽序列Fib-H P(s)通过BamHI和HindⅢ连入含目的基因的过渡载体获得家蚕丝心蛋白重链表达系统pSL-LBS(s)-目的基因-Fib-H P(s)。

7.根据权利要求6所述重组载体的制备方法,其特征在于:所述丝心蛋白重链启动子信号肽序列Fib-H P(s)由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4为引物,含有家蚕品种p50丝素基因的细菌人造染色体克隆为模板经PCR扩增而得。

8.根据权利要求6所述重组载体的制备方法,其特征在于:所述截短轻链结合位点LBS(s)由SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示序列为引物,含有家蚕品种p50丝素基因的细菌人造染色体克隆为模板经PCR扩增而得。

9.权利要求4所述重组载体的制备方法,其特征在于,制备方法如下:将权利要求3所获得的重组载体利用限制性酶AscⅠ和FseⅠ插入到piggyBac衍生载体pBac[3×P3DsRedaf]载体内形成最终的注射载体。

10.权利要求1所述家蚕丝心蛋白重链表达系统或权利要求2~4任一项所述重组载体在丝素层表达目的蛋白中的应用。