利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2020103152478
申请人: 陕西师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种基于功能基因鉴别冷藏羊肉新鲜程度的方法,其特征在于由以下步骤组成:(1)采集宰后生鲜羊肉和不同冷藏时间的羊肉样品,提取鲜羊肉和冷藏后羊肉样品的总RNA;

(2)根据羊β‑globin基因序列设计并合成特异性引物:上游引物:5'‑CGGCGGCGGGCGGCGCGGGCTGGGCGGGAAGGCCCATGGCAAGAAGG‑3'下游引物:5'‑GCCGGCCCGCCGCGCCCGTCCCGCCGCTCACTCAGCGCAGCAAAGG‑3'同时,设计并合成羊LOC102172960、LOC108633460和FAM110D基因的特异性引物:LOC102172960上游引物:5'‑TCGACCCCTTACGCTTTTCT‑3'LOC102172960下游引物:5'‑TTTGAGGGATCCGGGGAAAA‑3'LOC108633460上游引物:5'‑GGACCATGCACACAGGATTC‑3'LOC108633460下游引物:5'‑TGTAAGGGCAGAAGAAGGGG‑3'FAM110D上游引物:5'‑TGGCAAAGTTGAGGAAGTGC‑3'FAM110D下游引物:5'‑AATGGGCAGCAAAACTCCAG‑3'(3)以β‑globin为内参基因,对步骤(1)获得的RNA进行逆转录后对LOC102172960基因、LOC108633460基因和FAM110D基因进行实时荧光定量PCR扩增及检测,获得基因的Ct值,采‑△△Ct ‑((Ct对照‑Ctβ‑globin)‑(Ct试验‑Ctβ‑globin))用2 =2 法计算基因的相对表达量,判断羊肉新鲜程度:‑△△Ct ‑△△Ct

如果LOC102172960基因的2 值小于等于0.56、LOC108633460基因的2 值小于等于‑△△Ct

1.53、FAM110D基因的2 值小于等于1.10,冷藏羊肉为一级鲜肉;如果LOC102172960基因‑△△Ct ‑△△Ct ‑△△Ct ‑△△Ct的2 值为0.56<2 ≤0.80、LOC108633460基因的2 值为1.53<2 ≤1.65、‑△△Ct ‑△△Ct

FAM110D基因的2 值为1.10<2 ≤1.61,冷藏羊肉为二级鲜肉;如果LOC102172960基‑△△Ct ‑△△Ct ‑△△Ct ‑△△Ct因的2 值为0.80<2 ≤2.54、LOC108633460基因的2 值为1.65<2 ≤1.74、‑△△Ct ‑△△Ct

FAM110D基因的2 值为1.61<2 ≤2.94,冷藏羊肉为三级鲜肉;如果LOC102172960基‑△△Ct ‑△△Ct ‑△△Ct因的2 值大于2.54、LOC108633460基因的2 值大于1.74、FAM110D基因的2 值大‑△△Ct于2.94,冷藏羊肉为不新鲜肉,而且2 值越大,变质越严重。

2.根据权利要求1所述的基于功能基因鉴别冷藏羊肉新鲜程度的方法,其特征在于:所述的羊肉为山羊肉,且冷藏温度为2~4℃。

3.根据权利要求1所述的基于功能基因鉴别冷藏羊肉新鲜程度的方法,其特征在于:所述实时荧光定量PCR扩增的条件为:95℃,预变性5min;94℃,变性30s,60℃,退火60s,72℃,延伸60s,40个循环。

4.根据权利要求1所述的基于功能基因鉴别冷藏羊肉新鲜程度的方法,其特征在于:所述的LOC102172960基因、LOC108633460基因和FAM110D基因都是通过转录组学技术筛选出来的差异基因。