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专利号: 2020100821795
申请人: 江苏科技大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-03-02
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,包括以下步骤:(1)根据待检测的目标microRNA,设计荧光基团修饰的单链DNA探针,然后将其装载至链霉亲和素包被的磁珠(MBs)表面作为检测探针;

(2)在上述检测探针中加入待检测的目标microRNA样品和DSN,充分混合,孵育;

(3)孵育后,将磁珠和未反应的DNA探针完全去除,得分离液;

(4)将分离液注入到高效液相色谱系统进行分离和定量。

2.根据权利要求1所述的基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,步骤(1)中,所述磁珠上包被的链霉亲和素结合位点的摩尔量与DNA探针的摩尔量的比例为(3-5):1。

3.根据权利要求1所述的基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,步骤(1)中,装载过程在2×B&W缓冲液中进行,所述缓冲液是由Tris-HCl和EDTA、NaCl配制成。

4.根据权利要求1所述的基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,步骤(2)中,所述待检测的目标microRNA选自两种、三种或者多种不同目标microRNA的组合;所述目标microRNA为具有18-25个核苷酸的microRNA。

5.根据权利要求1所述的基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,步骤(2)中,所述目标microRNA为miRNA-155和miRNA-21,步骤(1)中对应的单链DNA探针选自P155和P21。

6.根据权利要求1所述的基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,步骤(2)中,所述孵育是在36-38℃下孵育140-160分钟。

7.根据权利要求1所述的基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,步骤(3)中,利用永磁体将磁珠和未反应的DNA探针完全去除,以降低背景干扰。

8.根据权利要求1所述的基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,步骤(4)中,所述高效液相色谱系统采用C18反向色谱柱,采用梯度洗脱模式。

9.根据权利要求8所述的基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,所述梯度洗脱模式为:甲醇的比例在20分钟内从10%变化到60%;流动相由有机相和包含TEAA的水相组成。

10.根据权利要求1所述的基于DSN循环扩增技术对多种microRNA同时进行检测的液相色谱法,其特征在于,所述方法的过程均在避光条件下进行。