利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2020100700466
申请人: 武汉工程大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-10-10
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.土著硫酸盐还原菌、土著脱氮菌联合脱除稀土浸矿场地残留铵盐淋出液中氨氮的方法,其特征在于包括以下步骤:

(a)采集稀土浸矿场地土壤样品和淋出液样品,经过分离、富集分别得到土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液、土著脱氮菌菌群富集培养液,对两种富集培养液进行筛选,分别得到土著硫酸盐还原菌菌群和土著脱氮菌菌群;

(b)利用土著硫酸盐还原菌菌群,对pH为4‑6且氨氮浓度不超过300mg/L的酸性稀土浸矿场地残留铵盐淋出液进行预处理,使其pH升高至7‑8,得到处理后的淋出液;

(c)将土著脱氮菌菌群接种到预处理后的淋出液中,添加脱氮培养基培养即可;

从土壤样品或淋出液样品中分离、富集土著硫酸盐还原菌的方法具体如下:按照200‑

500g:1L的比例,将采集来的土壤样品与无菌水混合并恒温振荡培养,静置后取上清液,得到土壤样品初始菌悬液;接着按照1:2‑3的体积比,将土壤样品初始菌悬液或采集的淋出液样品与硫酸盐还原菌富集培养基混合并恒温厌氧培养,得到第一次富集的硫酸盐还原菌菌群富集培养液;按照1:3‑4的体积比,在同样的培养条件下将第一次富集的硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌富集培养基混合再次进行恒温厌氧培养,得到第二次富集的硫酸盐还原菌菌群富集培养液;按照1:4‑5的体积比,在同样的培养条件下将第二次富集的硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌富集培养基混合进行第三次恒温厌氧培养;

重复上述厌氧培养过程3‑5次,得到土壤土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液或淋出液土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液;所述硫酸盐还原菌富集培养基按照重量份数计的配方为:蛋白胨8‑12份,牛肉膏4‑6份,NaCl 4‑6份,FeSO4·7H2O 0.45‑0.6份,蒸馏水1000份,pH值

6.2‑6.5;

土著硫酸盐还原菌菌群筛选方法具体如下:按照1:3‑6的体积比,将土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液与硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合并恒温厌氧培养,得到第一次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群;按照1:4‑8的体积比,在同样的培养条件下将第一次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群与硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合恒温厌氧培养,得到第二次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群;按照1:5‑10的体积比,在同样的培养条件下将第二次筛选的土著硫酸盐还原菌菌群与硫酸盐还原菌功能筛选培养基混合恒温厌氧培养;重复上述筛选培养3‑

5次,得到土著硫酸盐还原菌菌群;所述土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液选自土壤土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液、淋出液土著硫酸盐还原菌菌群富集培养液中的至少一种,或者两者以任意比例混合形成的混合物;所述硫酸盐还原菌功能筛选培养基按照重量份数计的配方为:KH2PO4 0.4‑0.6份,NH4Cl0.8‑1.2份,MgSO4·7H2O 0.05‑0.08份,Na2SO42.5‑4.5份,CaCl2 0.06‑0.1份,FeSO4·7H2O0.008‑0.012份,柠檬酸钠0.25‑0.35份,乳酸钠3.5‑4份,酵母浸粉1‑1.2份,蒸馏水1000份,pH值6.2‑6.5;

从土壤样品中分离、富集土著脱氮菌的方法具体如下:按照200‑500g:1L的比例,将采集来的土壤样品与无菌水混合并恒温振荡培养,静置取上清液,得到土壤样品初始菌悬液;

接着按照1:2‑3的体积比,将土壤样品初始菌悬液或采集来的淋出液样品与脱氮富集培养基混合恒温培养,得到第一次富集的脱氮菌菌群富集培养液;按照1:3‑4的体积比,在同样的培养条件下将第一次富集的脱氮菌菌群富集培养液与脱氮富集培养基混合再次进行恒温培养,得到第二次富集的脱氮菌菌群富集培养液;按照1:4‑5的体积比,在同样的培养条件下将第二次富集的脱氮菌菌群富集培养液与脱氮富集培养基混合进行第三次恒温培养;

重复上述培养过程3‑5次,得到土壤土著脱氮菌菌群富集培养液或淋出液土著脱氮菌菌群富集培养液;脱氮富集培养基按照重量份数计的配方为:蛋白胨8‑12份,NaCl 8‑12份,酵母提取物3‑7份,蒸馏水1000份,pH值7‑7.5;

土著脱氮菌菌群的筛选方法具体如下:按照1:3‑6的体积比,将土著脱氮菌菌群富集培养液与脱氮功能筛选培养基混合恒温培养,得到第一次筛选的土著脱氮菌菌群;按照1:4‑8的体积比,在同样的培养条件下将第一次筛选的土著脱氮菌菌群与脱氮功能筛选培养基混合恒温培养,得到第二次筛选的土著脱氮菌菌群;按照1:5‑10的体积比,在同样的培养条件下将第二次筛选的土著脱氮菌菌群与脱氮功能筛选培养基混合恒温培养;重复培养3‑5次,得到土著脱氮菌菌群;所述土著脱氮菌菌群富集培养液选自土壤土著脱氮菌菌群富集培养液、淋出液土著脱氮菌菌群富集培养液中的至少一种,或者两者以任意比例混合形成的混合物;所述脱氮功能筛选培养基按照重量份数计的配方为:葡萄糖或柠檬酸钠5‑20份,(NH4)2SO4 0.5‑2份,MgSO4·7H2O 0.3‑0.5份,NaCl 1.5‑3份,FeSO4·7H2O 0.01‑0.05份,MnSO4·4H2O0.01‑0.04份,K2HPO4 0.5‑1.5份,蒸馏水1000份,pH为7‑7.5;

步骤(b)预处理过程具体如下:将土著硫酸盐还原菌菌群接种到硫酸盐还原菌菌群培养基中进行恒温厌氧培养,待菌群生长到对数期得到硫酸盐还原菌菌群培养液;按照1:2‑

3:4‑5的体积比,将制得的硫酸盐还原菌菌群培养液、硫酸盐还原菌培养基、酸性稀土浸矿场地地残留铵盐淋出液混合均匀后进行恒温厌氧培养,培养完成后固液分离,得到pH为7‑8的预处理后的淋出液;所述硫酸盐还原菌菌群培养基按照重量份数计的配方为:KH2PO4 

0.4‑0.6份,NH4Cl 0.8‑1.2份,MgSO4·7H2O 0.05‑0.08份,Na2SO42.5‑4.5份,CaCl2 0.06‑

0.1份,柠檬酸钠0.25‑0.35份,乳酸钠3.5‑4份,酵母浸粉1‑1.2份,蒸馏水1000份,pH值6.2‑

6.5;所述硫酸盐还原菌培养基按照重量份数计的配方为:KH2PO4 0.4‑0.6份,MgSO4·7H2O 

0.05‑0.08份,柠檬酸钠0.25‑0.35份,乳酸钠3.5‑4份,酵母浸粉1‑1.2份,蒸馏水1000份,pH值6.2‑6.5。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于步骤(c)具体过程如下:将土著脱氮菌菌群接种到脱氮微生物培养基中培养,待菌群生长到对数期得到脱氮菌菌群培养液;按照1:2‑3:

4‑5的体积比,将脱氮菌菌群培养液、脱氮培养基、预处理后的淋出液混合均匀并恒温培养即可;所述脱氮微生物培养基按照重量份数计的配方为:柠檬酸钠3‑6份,(NH4)2SO4 0.3‑

0.5份,MgSO4·7H2O 0.3‑0.5份,NaCl 1.5‑3份,FeSO4·7H2O 0.01‑0.05份,MnSO4·

4H2O0.01‑0.04份,K2HPO40.5‑1.5份,蒸馏水1000份,pH为7‑7.5;所述脱氮培养基按照重量份数计的配方为:葡萄糖或柠檬酸钠5‑20份,MgSO4·7H2O 0.3‑0.5份,NaCl 1.5‑3份,FeSO4·7H2O 0.01‑0.05份,MnSO4·4H2O 0.01‑0.04份,K2HPO4 0.5‑1.5份,蒸馏水1000份,pH为7‑7.5。