1.一种检测组织蛋白酶B的生物传感器,其特征在于,所述生物传感器至少多肽‑DNA偶联物,DNA模板1和DNA模板2;
其中,
所述多肽‑DNA偶联物含有组织蛋白酶B的生物素化肽底物,其中肽底物C端修饰有生物素,肽底物N端与DNA 5'端连接;多肽‑DNA偶联物的DNA部分作为核酸扩增反应的引物;
所述DNA模板1包含三个主要区域X*‑Y*‑Z*;
所述DNA模板2包含三个主要区域Z*‑Y*‑X*;
所述X*序列为5'‑AAC AGA CTC ACT ACG ACC GGG AC‑3'(SEQ ID No.1);
所述Y*序列为5'‑AAC AGA CTC CAC AAA TTC GAC C‑3'(SEQ ID No.2);
所述Z*序列为5'‑CGT GAA TAA CTC TAC TAT C‑3'(SEQ ID No.3);
所述DNA模板1核苷酸序列为:5'‑CGT GAA TAA CTC TAC TAT CAACAGACTCC ACA AAT TCG ACC AACAGACTC ACT ACG ACC GGG AC‑磷酸基团‑3'(SEQ ID No.4);其中,下划线区域表示Nt.BstNBI的识别位点;
所述DNA模板2核苷酸序列为:5'‑AAC AGA CTC ACT ACG ACC GGG ACA ACA GACTCC ACA AAT TCG ACC AACAGA CTC CGT GAA TAA CTC TAC TAT C‑磷酸基团‑3'(SEQ ID No.5);其中,下划线区域表示Nt.BstNBI的识别位点;
所述多肽‑DNA偶联物中DNA的序列为5'‑GTC CCG GTC GTA GTG AGT CT‑3'(SEQ ID No.7);
所述多肽‑DNA偶联物的序列为:Cterm‑生物素‑KGFRLC‑Nterm‑GTC CCG GTC GTA GTG AGT CT。
2.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,两个DNA模板中,Y*区域的左右两侧设置有限制性核酸内切酶的识别位点。
3.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,所述含有组织蛋白酶B的生物素化肽底物具体为生物素修饰的KGFRLC(SEQ ID No.6)。
4.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,所述检测组织蛋白酶B的生物传感器还包括信号探针,所述信号探针为一RNA寡核苷酸,在所述RNA寡核苷酸两端分别使用荧光剂和淬灭剂进行修饰。
5.如权利要求4所述的生物传感器,其特征在于,所述荧光剂选自FAM,所述淬灭剂选自BHQ1。
6.如权利要求4所述的生物传感器,其特征在于,所述信号探针的序列为:5'‑FAM‑rArUrArArCrUrCrUrArCrUrArUrC‑BHQ1‑3'。
7.如权利要求1所述的生物传感器,其特征在于,所述检测组织蛋白酶B的生物传感器还包括磁珠、DNA聚合酶和核糖核酸酶H。
8.如权利要求7所述的生物传感器,其特征在于,所述磁珠为链霉亲和素修饰的磁珠。
9.一种采用权利要1‑8任一项所述的生物传感器检测组织蛋白酶B的方法,所述方法是非诊断目的的,其特征在于,所述方法包括:
1)将多肽‑DNA偶联物与磁珠共孵育得多肽‑DNA‑磁珠轭合物;
2)向步骤1)中加入待测样品共孵育进行切除反应,上清液磁分离待用;
3)向步骤2)处理后的上清液中加入DNA模板1、DNA模板2和信号探针共孵育进行酶辅助级联信号放大;
所述DNA模板1核苷酸序列为:5'‑CGT GAA TAA CTC TAC TAT CAACAGACTCC ACA AAT TCG ACC AACAGACTC ACT ACG ACC GGG AC‑磷酸基团‑3'(SEQ ID No.4);其中,下划线区域表示Nt.BstNBI的识别位点;
所述DNA模板2核苷酸序列为:5'‑AAC AGA CTC ACT ACG ACC GGG ACA ACA GACTCC ACA AAT TCG ACC AACAGA CTC CGT GAA TAA CTC TAC TAT C‑磷酸基团‑3'(SEQ ID No.5);其中,下划线区域表示Nt.BstNBI的识别位点;
所述多肽‑DNA偶联物中DNA的序列为5'‑GTC CCG GTC GTA GTG AGT CT‑3'(SEQ ID No.7);
所述多肽‑DNA偶联物的序列为:Cterm‑生物素‑KGFRLC‑Nterm‑GTC CCG GTC GTA GTG AGT CT。
10.如权利要求9所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中,所述磁珠为链霉亲和素包覆的磁珠;
共孵育处理条件为:室温下处理10‑20分钟;
或,所述步骤2)中,共孵育处理条件为:35~40摄氏度孵育0.5~2小时;
或,所述步骤3)中,共孵育处理添加为35~40摄氏度孵育0.5~2小时。
11.如权利要求10所述的方法,其特征在于,所述步骤2)中,共孵育处理条件为:37摄氏度孵育1小时。
12.如权利要求10所述的方法,其特征在于,所述步骤3)中,共孵育处理添加为37摄氏度孵育50分钟。
13.如权利要求9所述的方法,其特征在于,所述检测组织蛋白酶B的方法还包括对反应产物进行实时荧光检测和/或凝胶电泳,以及荧光光谱测量。
14.权利要求1‑8任一项所述生物传感器和/或权利要求9‑13任一项所述检测方法在组织蛋白酶B活性检测中的应用,对组织蛋白酶B活性检测的应用环境为外界自然环境,所述应用是非诊断目的的。