1.一种用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)将介孔硅纳米颗粒分散在含有菲啰啉‑硅的二氯甲烷溶液中反应,得到介孔硅‑菲啰啉纳米颗粒;
(2)介孔硅‑菲啰啉纳米颗粒与TbCl3·6H2O在乙醇中混合,回流,加入1,3‑二苯基‑1,3‑丙二酮反应,得到纳米荧光探针前驱体;
(3)将纳米荧光探针前驱体悬浮在聚乙烯亚胺水溶液中进行聚乙烯亚胺涂覆,得到聚乙烯亚胺改性的纳米荧光探针前驱体;
(4)聚乙烯亚胺改性的纳米荧光探针前驱体分散在混合溶液中,搅拌,得到纳米荧光探针;
步骤(4)中所述的混合溶液的制备方法是将EDC和NHS溶解在含有标记有罗丹明B的泛素的磷酸缓冲液中,搅拌活化,得到混合溶液。
2.根据权利要求1所述的用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于步骤(1)中所述的菲啰啉‑硅的制备方法是1,10‑菲啰啉‑5‑胺与异氰酸3‑(三乙氧基甲硅烷基)丙基酯在氯仿中搅拌,除去氯仿,将剩余的黄色粘性混合物搅拌反应后,加入冷己烷,得到浅黄色沉淀,然后将浅黄色沉淀溶解在甲醇中并过滤,除去甲醇,并加入冷己烷重新沉淀,得到菲啰啉‑硅。
3.根据权利要求1所述的用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于步骤(1)中所述的菲啰啉‑硅与二氯甲烷的配比为2‑10:10,菲啰啉‑硅以mg计,二氯甲烷以mL计;介孔硅纳米颗粒与菲啰啉‑硅的质量比为200‑700:2‑10。
4.根据权利要求1所述的用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于步骤(1)中所述的反应温度为50‑100℃,反应时间为2‑20h。
5.根据权利要求1所述的用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于步骤(2)中所述的TbCl3·6H2O与菲啰啉‑硅的质量比为2‑20:2‑10。
6.根据权利要求1所述的用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于步骤(2)中所述的TbCl3·6H2O与乙醇的配比为2‑20:5‑50,TbCl3·6H2O以mg计,乙醇以mL计。
7.根据权利要求1所述的用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于步骤(2)中所述的回流温度为60‑100℃,回流时间为1‑3h;反应温度为60‑100℃,反应时间为2‑30h。
8.根据权利要求1所述的用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于步骤(2)中所述的1,3‑二苯基‑1,3‑丙二酮与菲啰啉‑硅的质量比为10‑80:2‑10。
9.根据权利要求1所述的用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于步骤(3)中所述的纳米荧光探针前驱体与聚乙烯亚胺水溶液的配比为80‑120:10‑100,纳米荧光探针前驱体以mg计,聚乙烯亚胺水溶液以mL计。
10.根据权利要求1所述的用于检测去泛素化酶的纳米荧光探针的制备方法,其特征在于步骤(4)中所述的搅拌温度为20‑30℃,搅拌时间为20‑30小时。