1.用于鉴别猪水泡病毒、口蹄疫病毒与塞尼卡谷病毒的三重荧光RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于：由A盒和B盒组成，A盒含有裂解液、1.5 mL Eppendorf管，B盒含有阳性对照、阴性对照、RT反应液和PCR反应液；所述PCR反应液中有3对引物和3个MGB探针，引物分别用于扩增猪水泡病毒VP1基因片段、口蹄疫病毒5’ UTR基因片段和塞尼卡谷病毒3D基因片段，探针分别用于识别猪水泡病毒VP1基因、口蹄疫病毒5’ UTR基因和塞尼卡谷病毒3D基因。

用于检测猪水泡病毒VP1基因的引物对及其探针序列如下：

SVDV‑F：5’‑TGTCGATACCATTCATTG‑3’

SVDV‑R：5’‑CGTGTCTCATATATAGTGTC‑3’

SVDV‑P：5’‑FAM‑CATCGGCAACGCATACAGCAT‑BHQ1‑MGB‑3’其中FAM为荧光基团，BHQ1为淬灭基团；

用于检测猪口蹄疫病毒5’ UTR基因的引物对及其探针序列如下：

FMDV‑F：5’‑CCGGTTAGTACTCTTAACAC‑3’

FMDV‑R：5’‑CGTAGAGCGTCGAACTAA‑3’

FMDV‑P：5’‑ROX‑CTCCGCCTACTTGGTCGTCA‑BHQ2‑MGB‑3’其中ROX为荧光基团，BHQ2为淬灭基团；

用于检测猪塞尼卡谷病毒3D基因的引物对及其MGB探针序列如下：

SVV‑F：5’‑CTGGTTGGTACGGATTAC‑3’

SVV‑R：5’‑GGCAGGAGTCATCTTATAC‑3’

SVV‑P：5’‑HEX‑CGCCACCTCATTGAAGTCCAG‑BHQ1‑MGB‑3’其中HEX为荧光基团，BHQ1为淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的用于鉴别猪水泡病毒、口蹄疫病毒与塞尼卡谷病毒的三重荧光RT‑PCR检测试剂盒，其特征在于：A盒用于样本核酸的提取，其中裂解液的制备方法为：称取异硫氰酸胍47.25g，250mmol/L柠檬酸钠（pH7.0）10ml，加DEPC水至100ml；加入0.2mmol/L NaCl（pH4.5）10 ml，氯仿20ml，b‑硫基乙醇1ml，混匀，分装，6mL/瓶，置0～4℃保存；

B盒用于RNA的逆转录和PCR扩增反应，其中RT反应液的制备方法为：RT反应液的制备：RT缓冲液的配制：取20 mL 0.1mol/L的Tris‑HCl（pH 8.4），25 mL 1.0 mol/L的KCl溶液，

3mL 0.1mol/L的MgCl2溶液，用无RNase超纯水定容至100 mL，充分混匀；RT反应液的配制：RT缓冲液8 mL，dNTPs(2.5mmol/L) 8 L，反转录酶1 mL，RNA酶抑制剂1 mL，充分混匀，用

0.22 μm的除菌滤器过滤，无菌分装成300 µL/瓶，置于‑20℃保存；

PCR反应液的制备方法为：PCR缓冲液配置：取25 mL 1.0 mol/L的Tris‑HCl（pH 9.0），

20 mL 2.0 mol/L的(NH 4 )2 SO 4溶液，2 mL 2.0mol/L的MgSO4溶液，10 mL甘油，用无RNase超纯水定容至100 mL，充分振荡混匀；PCR反应液的配制：5 mL PCR缓冲液，4 mL dNTPs(2.5 mM)，1 mL Taq酶，1 mLSVDV‑F（20 pmol/µL），1 mL SVDV‑R（20 pmol/µL），1 mL SVV‑F（20 pmol/µL），1 mL SVV‑R（20 pmol/µL），1 mL SVDV ‑P（20 pmol/µL），1 mL SVV ‑P（20 pmol/µL），4 mL无Rnase超纯水，充分振荡混匀，用0.22 μm的除菌滤器过滤，无菌分装成600 µL/瓶，置于‑20℃保存；

试剂盒的使用方法如下：（1）将待检的液体样品或组织样品与100 µL的裂解液混合均匀或充分研磨或用匀浆机打碎，金属浴加热60℃ 5分钟，12 000 r/min离心2 min，轻轻地将上清吸出置于无RNase的Eppendorf管中，用于检测；（2）取出RT反应液和PCR反应液，置于室温融化，按每份取RT反应液5 µL、PCR反应液10 µL的比例预混两种反应液，操作过程要避光，按15 µL/管分装到荧光PCR专用管中；分别向分装好的荧光PCR管中加入5 µL待检样本核酸或阴性对照或阳性对照，在荧光定量PCR仪上运行以下程序： 42℃ 30 min，95℃ 3 min；然后进行94℃ 10 s，60℃ 20 s； 40个循环；荧光通道选择FAM、ROX和HEX，其中FAM用于检测猪水泡病毒VP1基因，ROX用于检测猪口蹄疫病毒5’UTR基因，HEX用于检测猪塞尼卡谷病毒3D基因，在每个循环的60℃时收集荧光信号；（3）结果判定。