利索能及
我要发布
收藏
专利号: 2021110859007
申请人: 赣南师范大学
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2025-10-14
缴费截止日期: 暂无
联系人

摘要:

权利要求书:

1.一种检测RB‑N1基因型柑橘衰退病毒的引物对,其特征在于,包括RB‑N1F和RB‑N1R2;

所述RB‑N1F的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;

所述RB‑N1R2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一种基于RT‑PCR技术检测RB‑N1基因型柑橘衰退病毒用试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述引物对。

3.根据权利要求2所述试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括PCR扩增用试剂和/或反转录用试剂。

4.根据权利要求3所述试剂盒,其特征在于,所述PCR扩增用试剂包括普通PCR扩增用试剂或荧光PCR扩增用试剂;

所述荧光PCR扩增用试剂包括2×SYBRGreenqPCRMix;

所述普通PCR扩增用试剂包括10×PCR‑buffer、dNTPs和r‑Taq酶。

5.根据权利要求3所述试剂盒,其特征在于,所述反转录用试剂包括以下试剂中的一种或几种:解链液、5×RT‑buffer、dNTPs、RNA酶抑制剂和反转录酶RTase。

6.权利要求1所述引物对或权利要求2~5任意一项所述试剂盒在检测柑橘植株感染RB‑N1基因型柑橘衰退病毒中的应用。

7.一种基于RT‑PCR技术检测RB‑N1基因型柑橘衰退病毒的方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)提取待检测样品的RNA;

2)将步骤1)中RNA进行反转录,得到cDNA;

3)以步骤2)中所述cDNA为模板,利用权利要求1所述引物对进行PCR扩增,得到PCR扩增产物;

4)将步骤3)中所述PCR扩增产物进行片段分析,得到待测样品是否感染RB‑N1基因型柑橘衰退病毒的结果。

8.根据权利要求7所述方法,其特征在于,所述PCR扩增包括普通PCR扩增和荧光PCR扩增;

所述普通PCR扩增的反应程序为:95℃预变性3分钟;95℃变性20秒,55℃退火30秒,72℃延伸45秒,35个循环;

所述荧光PCR扩增的反应程序为:95℃预变性20s;95℃5s,55℃15s,72℃20s,40个循环。

9.根据权利要求8所述方法,其特征在于,根据PCR扩增的方法进行片段分析:当采用普通PCR扩增时,所得PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,若得到的条带为524bp,表示待测样品感染RB‑N1基因型柑橘衰退病毒反之则没有感染或待检测样品感染RB‑N1基因型柑橘衰退病毒的浓度没有达到检测限。

10.根据权利要求8所述方法,其特征在于,当采用荧光PCR扩增时,所得PCR扩增产物进行实时荧光定量检测,所得溶解曲线在退火温度为55℃时为单一峰,说明待测样品感染RB‑N1基因型柑橘衰退病毒,反之则没有感染或待检测样品感染RB‑N1基因型柑橘衰退病毒的浓度没有达到检测限。