1.一种重组果胶酶,其特征在于,所述重组果胶酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.一种编码如权利要求1所述重组果胶酶的基因,其特征在于,所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种重组载体,其特征在于,为含有权利要求2所述的重组果胶酶基因的pGAPZα载体。
4.一种重组果胶酶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一、将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列重组构建到pGAPZα载体中,然后转化到毕赤酵母宿主菌中,再利用Zeocin筛选高表达重组果胶酶的转化子;
步骤二、将转化子在生物反应器中进行高密度发酵,所得到的上清液中即含有重组果胶酶蛋白。
5.根据权利要求4所述的重组果胶酶的制备方法,其特征在于,还包括步骤三、蛋白纯化:用镍亲合层析柱对步骤二得到的上清液进行纯:先用平衡缓冲液平衡层析柱,再将上清液过柱,用含30 mM咪唑的pH 7.4缓冲液预洗柱子,然后用含200 mM咪唑的pH 7.4 缓冲液溶液将融合蛋白洗脱下来即可。
6.根据权利要求4所述的重组果胶酶的制备方法,其特征在于,所述高密度发酵为将所述高表达重组果胶酶的转化子用YPG培养基培养至OD600为10~15作为种子菌,将种子菌按1:
10的比例接种到含有无机盐培养基的发酵罐中;在28℃继续诱导培养72‑96小时并补加70%的甘油作为碳源;利用浓氨水来调节pH为4.0。
7.一种权利要求1所述的重组果胶酶的用途,其特征在于,所述重组果胶酶的用途为提高果汁产量、构建重组细胞或构建试剂盒。