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专利号: 2019111209615
申请人: 山东省科学院生态研究所(山东省科学院中日友好生物技术研究中心)
专利类型:发明专利
专利状态:已下证
更新日期:2026-11-04
缴费截止日期: 暂无
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摘要:

权利要求书:

1.一种复合芽孢杆菌菌剂,其特征在于,包括甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus KNK-1、蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus BCJB01和巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium BMJBN02。

2.根据权利要求1所述的复合芽孢杆菌菌剂,其特征在于,甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus KNK-1已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为CGMCC NO.16842,保藏日期2018年11月30日;所述蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus BCJB01已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为CGMCC NO.10477,保藏日期2015年1月30日;所述菌株巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium BMJBN02已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为CGMCC NO.10478,保藏日期2015年1月30日。

3.一种复合芽孢杆菌菌剂的制备方法,其特征在于,由以下步骤进行:

(1)将保存的甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus KNK-1、蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus BCJB01和巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium BMJBN02分别接种到液体LB培养基中,30℃±1℃条件下培养至对数生长期,种子液浓度不低于1.0×108cfu/mL,获得供接种用使用的种子液;

(2)将步骤(1)获得的甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus KNK-1、蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus BCJB01和巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium BMJBN02的混合,获得混合种子液,混和种子液中甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus KNK-1、蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus BCJB01和巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium BMJBN02的活菌数量比为2:2:6~1.5:1.5:7;

(3)将步骤(2)获得的混合种子液以10%(体积百分比)的接种量接种到发酵培养基,使发酵培养体系中菌体初始浓度不低于1.0×107cfu/mL,培养条件为:在30℃±1℃条件下,通气保压0.05MPa,溶氧量20%~25%,转速200~220r/min,发酵过程中保持发酵液PH7.0~7.2,培养36h后测量活菌总量,活菌总量达到1.0×109cfu/mL,混合发酵结束,得到发酵液;

(4)将步骤(3)得到发酵液,按照20%(质量体积比)添加硅藻土,充分混匀,进行喷雾干燥,得到甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus KNK-1、蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus BCJB01和巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium BMJBN02的发酵液预制剂;添加合适的助剂,制备获得复合芽孢杆菌菌剂,菌剂中活菌数量不低于1.0×1011cfu/g。

4.根据权利要求3所述的复合芽孢杆菌菌剂,其特征在于,复合芽孢杆菌菌剂包括可湿性粉剂、水分散粒剂、悬浮剂、悬乳剂或水乳剂。

5.根据权利要求4所述的复合芽孢杆菌菌剂,其特征在于,可湿性粉剂的制备方法为,取91~94份骤(4)获得的混合物,1~2份有机硅BD-3077,1~1.5份羧甲基纤维素钠,1~2份壳聚糖,2~3.5份木质素磺酸钠和1份辅酶A充分混合,通过气流粉碎机,混合物粉碎至Φ=

45μm以下,即获取复合芽孢杆菌的可湿性粉剂,可湿性粉剂中活菌数量不低于1.0×

1011cfu/g。

6.根据权利要3-5任一权利要求所述的复合芽孢杆菌菌剂,其特征在于,步骤(2)中发酵培养基配方:玉米粉2%,豆粕粉1%,酵母粉0.3%,CaCl20.1%,MgSO4˙7H2O 0.05%,K2HPO˙3H2O 0.3%,KH2PO40.2%,FeSO4˙7H2O 0.0008%(皆为质量比),余量为水,pH7.O~

7.5。

7.一种复合芽孢杆菌菌剂在促进植物生长和/或防治植物病原菌侵染引起的相关植物病害中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,复合芽孢杆菌菌剂在促进茄果类、瓜果类植物生长和/或防治土传病原菌镰刀菌和霜霉菌引发的茄果类、瓜果类病害中的应用;进一步的,复合芽孢杆菌菌剂在防治霜霉菌引发的茄果类、瓜果类霜霉病、枯萎病和疫病中的应用。

9.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,复合芽孢杆菌菌剂应用于工厂化育苗、田间直播或叶面喷施防治病害。

10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,育苗使用时以10g/L添加到营养基质中获得栽培基质;田间直播时以3kg/亩进行应用;防治病害时可采用叶面喷施,用量为500倍稀释液即可获得理想防效。